Human DiI-Low Density Lipoprotein (Human DiI-LDL) 红色荧光标记人源低密度脂蛋白

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Human DiI-Low Density Lipoprotein (Human DiI-LDL) 红色荧光标记人源低密度脂蛋白

HRD0401

500μg

4C避光

2255

 

产品描述

低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,简称为LDL)是通过脂蛋白酯酶的水解作用,脱去极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三脂,释放游离脂肪酸转化而来的。因甘油三酯的去除使得胆固醇所占比例提高,增加颗粒本身密度,从而得到LDL。LDL与脊椎细胞表面的受体特异性结合,然后通过受体介导的内吞作用将胆固醇运输到全身各处细胞。因此,LDL可以用来研究受体介导的内吞作用过程,尤其是在动脉粥样硬化等疾病中,血浆来源的LDL还可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。

红色荧光标记人源低密度脂蛋白(Human DiI-LDL)是标记荧光探针Dil(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate)的LDL,可以用来观察培养细胞的LDL结合位点,或筛选LDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平,或检测组织内的受体水平。 DiI-LDL是研究细胞内吞作用非常好的标记物。

Human DiI-LDL为无菌包装,可以直接稀释使用。除提供DiI-LDL,我们还提供不带标记的LDL,以及修饰化的LDL如乙酰化LDL(Ac-LDL),以及氧化修饰的LDL(Ox-LDL)。


制备方法

      纯化的人健康血浆来源的LDL直接标记上DiI荧光探针,然后通过超速离心以及透析的方法纯化回收标记产物,并滤膜过滤除菌。纯化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS,pH 7.4中。


产品性质

浓度(Concentration)

0.8-3.0 mg/ml

外观(Appearance)

乳状液体

吸光度比例(Absorbance   Ratio)

Dil/Protein=555nm/275nm=1.30

缓冲液组分(Buffer   Components)

0.02 mM EDTA in PBS,   pH 7.4

 

运输与保存方法

冰袋运输;

4C无菌避光,收到货后可稳定保存6周。千万不可冻存!使用时一定要无菌操作!


注意事项


1)本品的稀释工作液极不稳定,建议即配即用;

2)长期贮存可能会有沉淀析出,属于正常现象,低速离心2 min去除沉淀即可使用;

3)LDL与LDL受体的结合需要Ca2+和Mn2+的参与,过量EDTA的存在会抑制其结合;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操。

5)  本产品仅作科研用途!


操作步骤

1)工作液制备:无菌条件下,将DiI-LDL用细胞培养基稀释至20-40 g/ml。

2)细胞准备:吸除培养板内培养基,向活细胞内加入上述LDL,37℃培养4-5小时。

3)孵育结束,吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培养基,并用无探针的培养基洗几次。

4)根据实验需求用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

a)荧光显微镜观察

采用标准的罗丹明激发:发射滤光片(或建议使用波长为:Ex/Em=549nm/565nm);若需要请使用含3%甲醛的PBS进行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因Dil易溶于有机溶剂。注:需设阳性细胞以做对照。

b)细胞分选(流式细胞术)

胰蛋白酶处理细胞或者加入EDTA制成单细胞悬液,选用合适的已标记纯化细胞用作阴性和阳性对照,从而进行流式分选设门(gate)。(建议使用波长为Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm)。

 

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