• 组织无机磷试剂盒(分光光度法)-HRK1825.pdf

产品信息

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等，此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。

测定原理

钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收可计算无机磷含量。

自备仪器和用品

可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配置

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入20 mL蒸馏水，充分溶解后加入试剂二（全部），混匀。

标准品：液体×1支， 4℃保存。

无机磷提取

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定

1.分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。

2.打开水浴锅，调节温度到40℃。

3.空白管：取EP管，依次加入500μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A空白管。

4.标准管：取EP管，依次加入50μL标准液，450μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A标准管。

5.测定管：取EP管，依次加入50μL上清液，450μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

组织无机磷含量计算公式

-按照蛋白含量计算

无机磷含量(μmol/mg prot)= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷Cpr=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷Cpr

-按照样本质量计算

无机磷含量(μmol/g )= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W

C标准液：1mmol/L；V总：上清液总体积，1mL=0.001 L；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

注意事项

1.试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。

2.40min内完成比色。

3.最低检出限为10μmol/L。

4.本产品仅作科研用途！