果糖-1,6-二磷酸(Fructose-1,6 Diphosphate,FDP)试剂盒

果糖-1,6-二磷酸(Fructose-1,6 Diphosphate,FDP)试剂盒

价格:3,500

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产品信息

 

产品名称

测定方法

产品编号

规格

果糖-1,6-二磷酸(FDP)试剂盒

微量法

HRK1127

100管/96样

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义

 

果糖1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂,是糖酵解途径的重要中间体,广泛存在于动植物和微生物体内,能影响细胞内钾离子的浓度,改善葡萄糖和其他能量底物的代谢,促进组织氧的释放,广泛应用于临床医药制剂。

 

测定原理

 

醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸降解,产物与DNPH缩合成紫红色物质,在540nm有特征吸收峰。

 

自备实验用品及仪器

 

天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

 

试剂组成和配制

 

试剂一:液体110mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体0.4mL×1支,4℃避光保存。

试剂三:液体4mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体16mL×1瓶,4℃保存。

 

样品处理

 

1.组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清待测。

2.细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清待测。

3.液体:直接检测。

 

测定操作

 

 

对照管

测定管

样品(μL)

 

20

蒸馏水(μL)

20

 

试剂一(μL)

44

40

试剂二(μL)

 

4

充分混匀,37℃反应30min

试剂三(μL)

40

40

充分混匀,37℃温育10min

试剂四(μL)

160

160

充分混匀,于37℃温育10min,于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定540nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管,对照管只要做一管。

 

计算公式

 

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y= 0.6971x+0.0012,R2=0.9983

1.按照质量计算

FDP(mg/g 鲜重)= (△A-0.0012) ÷0.6971÷(W÷V样总)= 1.43×(△A-0.0012)÷W

2.按照细胞数量计算

FDP(mg/104 cell)= (△A-0.0012) ÷0.6971÷(细胞数量÷V样总)=1.43×(△A-0.0012)÷细胞数量

3.按照液体体积计算

FDP(mg/mL)= (△A-0.0012) ÷0.6971= 1.43×(△A-0.0012)

W:样本质量,g;V样总:加入提取液体积,1mL

 

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y= 0.3486x+0.0012,R2=0.9983

1.按照质量计算

FDP(mg/g 鲜重)= (△A-0.0012) ÷0.3486÷(W÷V样总)= 2.87×(△A-0.0012)÷W

2.按照细胞数量计算

FDP(mg/104 cell)= (△A-0.0012) ÷0.3486÷(细胞数量÷V样总)= 2.87×(△A-0.0012)÷细胞数量

3.按照液体体积计算

FDP(mg/mL)= (△A-0.0012) ÷0.3486= 2.87×(△A-0.0012)

W:样本质量,g;V样总:加入提取液体积,1mL

 

注意事项

 

最低检出限为1.72 mg/L。

本产品仅作科研用途!

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