价格:1,299
货号HRbio™ Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(OneStep gDNA Removal)
产品详情
产品详情
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
|
HRbio™ Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(OneStep gDNA Removal)一步法基因组DNA去除逆转录试剂盒（qPCR专用） |
HRF0181 |
10 T |
|
HRF0182 |
100 T |
产品描述
本制品采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶，大幅度提高了热稳定性和反转录效率。5×HRbio™ III RT Master Mix为一管式反转录预混Mix，含有反转录所需的所有试剂（HRbio™ III Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer），只需加入模板RNA和水即可进行反应。使得cDNA的合成更加的方便快捷，特别适合cDNA合成以后的两步法Real Time PCR检测。通常Real Time RT-PCR等实验需要先用DNase I消化去除RNA中残留的基因组DNA(gDNA) ，但是传统DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损失。本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊gDNA Remover，只需一步操作，即可同时完成基因组清除与逆转录反应，极大简化了操作步骤，避免了复杂加样过程造成的样品污染与RNA降解的风险。
产品用途
第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。
产品特点
1.新一代反转录酶大幅度提高了热稳定性和反转录效率。
2.全预混的反转录Mix，只需一步同时加入gDNA Remover、模板RNA和水，实现cDNA 合成和去除基因组DNA同时进行。15分钟简单快速完成反转录。
3.RNA模板的体积最多可加到总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
4.预混合Mix在-20°C不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
5.本产品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
产品组分
|
编号 |
组分 |
HRF0181（10T） |
HRF0182（100T） |
|
HRF018-A |
RNase free H2O |
1 mL |
1 mL |
|
HRF018-B |
gDNA Remover |
10 μL |
100 μL |
|
HRF018-C |
5×HRbio™ III RT Master Mix |
40 μL |
400 μL |
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存，避免反复冻融，有效期1年。
注意事项
1）避免RNase污染。
2）为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3）5×HRbio™ III RT Master Mix和gDNA Remover含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5×HRbio™ III RT Master Mix和gDNA Remover内包含的酶均为过量，即使每次5 ×HRbio™ III RT Master Mix按照3.6 μl-3.8 μl使用，gDNA Remover按照0.8 μl-0.9 μl也不影响使用效果。
使用方法
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例，也可以采用10μl反应体系)
1.将模板RNA、gDNA Remover 、5×HRbio™ III RT Master Mix在冰上解冻；RNase free H2O在室温（15-25°C）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2.在RNAse free管里面加入以下成分：(建议使用PCR管冰上配制，置PCR仪反应)
|
组分 |
浓度 |
|
Total RNA/mRNA |
≤ 15 μl * |
|
5×HRbio™ III RT Master Mix |
4 μl（见注意事项3） |
|
gDNA Remover |
1 μl（见注意事项3） |
|
RNase free H2O |
to 20 μl（补足到总体积20 μl） |
* Total RNA不超过2 μg，mRNA不超过200 ng (20 μl体系)
3.移液器轻轻吹打混匀(总体积20μl)
如使用mRNA模板是来源于真核细胞（如人、小鼠的组织细胞）含有Poly(A)尾结构，42°C孵育15 min。
如使用mRNA模板是来源于原核细胞（细菌）或者病毒等不含Poly(A)尾结构，25°C孵育10 min，42°C孵育15 min。
注意：如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至50°C-55°C（先在42°C孵育2分钟以清除基因组DNA），有助于提高产量。
4.85°C加热 5 sec 失活HRbio™ III Reverse Transcriptase和gDNA Remover。
5.得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA应避免反复冻融。
RT-qPCR
取适量反转录cDNA产物（一般不超过qPCR反应体积的1/10）作为qPCR模板，按照厂家荧光定量PCR试剂说明书进行下一步荧光定量PCR。 如果表达基因含量丰富，可以根据实际适当稀释cDNA模板使用。
注意事项
1.避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 5×HRbio™ III RT Master Mix和gDNA Remover含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前
请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5×HRbio™ III RT Master Mix和gDNA Remover内包含的酶
均为过量，即使每次5×HRbio™ III RT Master Mix按照3.6 μl-3.8 μl使用，gDNA Remover按照0.8 μl-0.9 μl
也不影响使用效果。
4.本产品仅作科研用途！