价格:650
货号土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性测定试剂盒
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
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土壤谷氨酰胺酶(S- GLS) 活性测定试剂盒 |
分光光度法 |
HRK19075 |
50管/48样 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理
S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品
台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。
试剂组成和配制
试剂一×1瓶，8 mL，4 ℃保存；
试剂二×1瓶，20 mL，4 ℃保存；
试剂三×1瓶，30 mL，常温保存；
试剂四×1瓶，10 mL，常温保存；
试剂五×1瓶，6 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP管中加入下列试剂）：
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试剂名称（uL） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
0.1 |
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甲苯 |
25 |
25 |
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振荡混匀，室温放置15min |
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试剂一 |
100 |
100 |
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试剂二 |
400 |
400 |
混匀，37℃水浴2 小时
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试剂三 |
525 |
525 |
混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，依次加入下列试剂
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上清液 |
650 |
650 |
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试剂四 |
150 |
150 |
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试剂五 |
100 |
100 |
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试剂六 |
100 |
100 |
混匀，室温静置15min，420nm处读取测定管和对照管吸光值，
计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。
注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
酶活性计算
标准条件下测定的回归方程为y = 3.8488x +0.0057；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值A。
单位定义：每g土样每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（nmol/min/g 土样）=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反总÷W÷T×1000=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。
V反总：反应体系总体积：1.05mL；T：反应时间，2h=120min；W：样本质量，g; 1000，μmol到nmol换算系数。
本产品仅作科研用途！