• 说明书丨HR0334-细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒.pdf

产品信息 

产品描述

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)采用经典的碘化丙啶染色(PI staining)方法，通过流式细胞仪分析对细胞周期与细胞凋亡进行检测。

本试剂盒适用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。当用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测时，则须把组织消化成单细胞状态。该试剂盒检测每个样品细胞含量范围一般为10⁵-10⁶之间，足够检测50个样品。

产品组分

运输和保存方法

1、-20℃保存，一年有效。碘化丙啶PI染色液(20X)需避光保存。

2、本试剂盒可4℃保存，一个月内有效。

使用方法

一、细胞收集：

1.a.对于贴壁细胞：收集细胞培养液至离心管内备用。常规方法用胰酶消化细胞，用之前收集的细胞培养液终止消化，并轻轻吹散细胞，收集至离心管内。【注意：消化后的吹打需轻柔，避免细胞破碎】

b.对于悬浮细胞：小心吸取所有含有细胞的培养基至离心管内。

2.将以上收集的细胞1000g左右离心3-5min，沉淀细胞。【若细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍加大离心力】小心吸弃上清，残留约50μl，以免吸走细胞。

3.加入1ml预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml离心管内。再次1000g左右离心3-5min，沉淀细胞，小心吸弃上清，残留约50μl，以免吸走细胞。轻轻弹击离心管底，以适当分散细胞，避免细胞成团。

二、细胞固定：

1.加入1mlPBS充分重悬，成单细胞，轻轻边涡旋边缓慢滴加3ml预冷的无水乙醇，至终浓度75%，4℃固定4h以上，或者4℃静置过夜（18-24h）效果更佳。【固定后的细胞可以-20℃保存一个月】

2.将固定好的细胞悬液1000g左右离心3-5min，沉淀细胞。【若细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍加大离心力】小心吸弃上清，残留约50μl，以免吸走细胞。

3.加入1ml预冷的PBS，重悬细胞，再次1000g左右离心3-5min沉淀细胞，小心吸除上清，残留约50μl，以免吸走细胞。轻轻弹击离心管底，以适当分散细胞，避免细胞成团。

三、染色工作液的配制

按照染色缓冲液：碘化丙啶PI染色液(20X)：RNaseA(50X)=100:5:2的比例混合配置

呈染色工作液，请参考下表，根据样品数量选择合适的工作液体积：

【注意：配制好的染色工作液短时间内可以4℃保存，宜当天使用。】

四、染色

每管细胞样品加入500μl染色工作液，轻柔并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30min。染色完成后置于4℃避光存放，宜在24h内完成流式上机检测。

五、流式检测和分析

用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

注意事项

1.请使用流式细胞仪进行检测，进样速度调为低速，若峰形较宽，可能因为进样速度太快。

2.请按照说明书提供的细胞固定方法进行操作，尽量获得单个细胞，并避免DNA的降解。

3.细胞样品尽量减少碎片的产生，请注意不要消化过度，不可过度吹打，离心转速不能过高。

4.需自备PBS和无水乙醇。

5.荧光染料均存在淬灭问题，碘化丙啶PI染色液保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。建议染色后尽量当天完成检测。

6.碘化丙啶对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。

7.为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

8.本产品仅供科研用途！