• 说明书丨HRN0143-Tripure+Reagent（Chloroform+free）总RNA提取试剂（无氯仿）.pdf

产品信息

产品描述

    Tripure Reagent（Chloroform free）是传统 Trizol 的免氯仿升级版，广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞、细菌等样品中提取 Total RNA 和 Small RNA。与传统 Trizol 提取方法相比，本产品不需要使用氯仿进行分层，操作更简单，且全程可在常温进行。本产品提取的 RNA 基本不残留 DNA，提取的 RNA 可以直接用于 cDNA 克隆、qRT-PCR 检测、mRNA 纯化、体外翻译、Northern-blotting 杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。

产品组分

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

应用范围

适用于各种动植物组织/细胞总 RNA、DNA、蛋白的快速抽提

运输和保存方法

本产品可在室温下稳定保存1年。尽管如此，为达到最佳效果，我们强烈建议保存在2-8℃的环境下。

冰袋运输。2-8℃，避光保存，有效期1年。

注意事项

1.RNA最重要的指标就是没有降解完整性高，目前普通的分光光度计包括Nanodrop 是无法通过测量 OD260/280 和 OD260/230 来确认 RNA 是否降解的。判断 RNA 是否降解可以通过跑 1%琼脂糖电泳检测通过直接观察28S:18S 比值来判断是否降解，或者用采用安捷伦 Bioanalyzer2100 仪器检测，测定 RNA 产物的 RIN 值

2.本产品与传统 Trizol 一样属于通用型总 RNA 提取试剂，具有和 Trizol 类似的适用范围。绝大部分常规动物组织细胞(如：肝脏、肾脏、脑组织、培养细胞)、简单植物组织(如水稻、玉米、拟南芥、烟草、小麦等)都有良好效果。但是对于多糖多酚植物如棉花，某些难破壁的细菌等样品不适用。

3.本产品仅作科研用途！

使用方法（实验前请先阅读注意事项！）

提示：用 Tripure在抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明，所有的操作应该在在 15~30°C 的室温条件下。

1. 样本处理
a.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在 Tripure 中迅速研磨，每25 - 50 mg组织加入0.5 ml Tripure，混匀。

b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎，每15-50 mg组织加入0.5 ml Tripure，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入0.5 ml Tripure 混匀。

c.单层培养细胞：尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm 的培养板中加入0.5ml Tripure 覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的Tripure 量（每10 cm²加0.5 ml）。当Tripure 量不足时可导致抽提的RNA中污染有 DNA。
▲注意：贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂开，并已释放出全部RNA，继续做即可。

d.细胞悬液： 离心收集细胞。 在 Tripure 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每1-5×10⁶ 的动物细胞，植物细胞或每5×10⁶细菌加0.5 ml Tripure。在加入Tripure 前应避免洗涤细胞，因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些细菌可能需要使用匀浆器。

e.液体样本：每200 μl（低于200 μl时，可用RNase-free H2O补足）血浆、血清等液体样本，加入0.5ml Tripure 后振荡混匀 。

2. 向上述裂解液中加入 2/5 体积的 RNase-free H2O(每 500 μl Tripure 加 200μl 水)，剧烈振荡混匀，室温静置 5 min。
▲当处理样本量较大50 mg 左右时，可延长室温静置时间到10 - 15 min。

3. 室温 12,000 rpm 离心 15 min。

4. 离心后溶液分成上层水相(含 RNA)和下层沉淀(含蛋白质、DNA、多糖等杂质)，小心吸取上层水相至一个新的离心管中。
▲上层水相约占总体积的90%，如用500 μl Tripure 进行提取，上层水相约为630 μl，建议吸取500 μl；提取微量样本时，为减少RNA损失，可以全部转移上清。
▲当样本量较小时，离心后可能不会出现下层沉淀，属于正常现象，可继续按后续步骤完成提取。

5. 加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温静置 10 min。

6. 室温 12,000 rpm 离心 10 min。通常可以看见白色沉淀，小心弃去上清。
▲RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧壁和管底形成薄片状沉淀（样品量少的情况下，RNA沉淀散在管侧壁和管底有可能看不到明显沉淀）。部分组织材料由于含有较多的代谢产物，导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上，此时，请沿液面缓慢吸取上清。

7. 加入 1 ml 75%乙醇(RNase-free ddH2O 配制)漂洗，涡旋震荡 15 sec，让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次。

8. 室温 12,000 rpm 离心 3 min，小心弃上清。

9. 重复步骤 7 和 8 漂洗一遍，小心弃尽上清。
▲为减少杂质残留，应尽可能的将上清弃干净。建议弃去大部分上清后，短暂点甩离心将残留液体甩至管底，用200 μl 吸头吸尽残留的液体，保留管底及管侧壁的白色RNA沉淀。

10. 室温晾干约 1 min，在加入适量的 RNase-free ddH2O 溶解沉淀，室温涡旋3 min(或使用移液器反复吹打管底和管壁的沉淀帮助溶解)，使 RNA 沉淀充分溶解。提取的 RNA 产物可以分装后在- 85 ~ - 65°C 长期保存，在- 30 ~ - 15°C 仅可短期保存。
▲一般稍稍晾干RNA即可，过度干燥会导致RNA难于溶解。
▲注意：从某些样本提取RNA时，RNA沉淀并非完全聚集在离心管管底，而是也以均匀的薄雾状沉淀吸附在管侧壁上。请注意仔细观察，并用移液器吹打管底和沉淀所在的管侧壁充分溶解所有的RNA。