RIPA lysis buffer RIPA裂解液

RIPA lysis buffer  RIPA裂解液

价格:228

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RIPA lysis buffer  RIPA裂解液

HRX0081

100 mL

-20℃

198.00

 

产品描述

      RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。本裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和ELISA等实验。

 

运输与保存方法


冰袋(wet ice)运输。4℃保存,一年有效。


注意事项

 

1)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

4)本产品仅作科研用途!


使用说明

一、培养细胞样品

 

1.取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。

2.贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入300-500 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。细胞充分裂解后应无没有明显的细胞沉淀。

悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入300-500 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成0.5-1×106个细胞/管,然后再裂解。

3.充分裂解后,10000-14000 g离心3-5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入300 μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到400 μL或500 μL。

 

二、组织样品

1.把组织剪切成细小的碎片。

2.取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。

3.按照20-80 mg组织加入1 mL裂解液的比例加入裂解液。

4.用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5.充分裂解后,10000-14000 g离心3-5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作

6.如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

 

【注】RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

 

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