• 说明书丨HRX0081-RIPA lysis buffer RIPA裂解液.pdf

产品信息

产品描述

      RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。本裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和ELISA等实验。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。4℃保存，一年有效。

注意事项

1）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用说明

一、培养细胞样品

1.取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

2.贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入300-500 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。细胞充分裂解后应无没有明显的细胞沉淀。

悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入300-500 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成0.5-1×10⁶个细胞/管，然后再裂解。

3.充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入300 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到400 μL或500 μL。

二、组织样品

1.把组织剪切成细小的碎片。

2.取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

3.按照20-80 mg组织加入1 mL裂解液的比例加入裂解液。

4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5.充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作

6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

【注】RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。