过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒(微量法)

过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒(微量法)

价格:580

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产品信息

 

产品名称

测定方法

产品编号

规格

过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒

微量法

HRK0518

100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

 

测定意义

 

POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

 

测定原理

 

POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。

 

需自备的仪器和用品

 

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

 

试剂的组成

 

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体100μL×1支,4℃保存;

试剂三:液体100μL×1支,4℃保存。

 

粗酶液提取

 

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

 

测定步骤

 

1.分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至470nm,蒸馏水调零。

2.工作液的配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照6(mL):1.5(μL):1(μL)的比例混匀;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min以上;现配现用。

3.在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液,混匀,记录470nm下1min时吸光值A1和2min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

 

注意事项

 

如果ΔA小于0.005,可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。

 

POD活性计算

 

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)POD活性

单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

计算公式:

POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =2000×ΔA

2、组织、细菌或细胞POD活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

POD(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =4×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。

 

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)POD活性

单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.005÷T =4000×ΔA

2、组织、细菌或细胞POD活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。

POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =8×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。

注意事项

本产品仅作科研用途!

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