价格:1,200
货号土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
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土壤几丁质酶（S-Chitinase）试剂盒 |
微量法 |
HRK19051 |
100管/48样 |
正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板，甲苯、蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体65mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理
新鲜土样风干，过30-50目筛。
测定操作表
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对照管 |
测定管 |
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土样（g） |
0.1 |
0.1 |
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甲苯（μL） |
15 |
15 |
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混匀，25℃静置15min |
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蒸馏水（μL） |
100 |
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试剂一（μL） |
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100 |
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混匀，37℃培养24h |
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蒸馏水（μL） |
200 |
200 |
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4000rpm，4℃，离心10min，取上清200μL于新的EP管中 |
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试剂二（μL） |
20 |
20 |
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混匀，沸水浴5min |
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试剂三（μL） |
600 |
600 |
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混匀，37℃显色20min，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中，蒸馏水调零，测定585nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，ΔA=A测定管-A对照管。 |
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计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值ΔA。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V反总÷W÷T×1000
= 598×（ΔA +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL
用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值ΔA。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷2.6357×V反总÷W÷T×1000
= 1195×（ΔA +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL
注意事项
试剂一充分混匀后再使用。
本产品仅作科研用途！