• 说明书丨HRQ0611-真菌基因组DNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息:

产品描述：

本试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的真菌组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤，进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。

产品组分：

运输和保存： 

1、本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2、试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机

2、需要自备乙醇、1×PBS、RNase A（100mg/mL）等。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA产量降低。

4、ATL、AL和AW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、开始实验前将需要的水浴先预热到 56℃备用。

6、真菌种类复杂，没有一种试剂盒可以提取所有种类的真菌DNA。如果某些真菌多糖多酚含量过于丰富、次级代谢产物太复杂导致本试剂盒效果不佳，可以选择本公司的HRN0544 CTAB法植物DNA提取试剂盒提取真菌，一般该试剂盒对于多糖多酚次级代谢产物复杂的真菌DNA提取效果良好。

7、本产品仅作科研用途！

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer AW1，Buffer AW2中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

1、取适量真菌组织（新鲜组织100 mg 或干重组织30 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2、转移细粉到一个1.5mL离心管。

3、加入25μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育30min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

4、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

5、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、重复一遍步骤7。

9、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

10、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

11、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）