• Minute™ 神经元组织_细胞单个细胞核分离试剂盒 BN-020_CN.pdf

产品信息

产品描述

      单细胞RNA测序是研究组织复杂组成的有力技术，然而神经元是高度互联的，很难从神经元组织中，例如脑和脊髓等获得单个细胞。从冷冻的神经元组织中分离出完整的细胞更加困难。由于这些限制，因此单细胞RNA测序可以使用单核测序取代。从神经元组织中分离单个核的传统方法比较繁琐、耗时长，得率低，且很难去除髓鞘和其他细胞成分的污染。本试剂盒专门为解决以上问题而设计，操作简单、快速、且分离效率高。与传统方法相比，该试剂盒所需的起始原料更少，可处理1-25mg范围的样品。缓冲液中含有专用的表面活性剂，可有效的溶解细胞。如需要不含有表面活性剂的完整细胞核分离，可选购cat#NI-024。

应用

FACS分析、单核分析（如RNA-seq和ATAC-seq）、免疫荧光染色、细胞周期分析和凋亡研究等。

使用说明

本操作步骤是针对脑组织，脊髓和其他神经组织样品：（缓冲液需提前预冷）

1. 称取 1-25mg 新鲜/冷冻组织，将组织放到 1.5ml 管中，加 200ul 预冷的缓冲液 A。用提供的研磨杵按压扭转匀浆组织 2-3min。(研磨杵是重复使用的，用 70%的酒精清洗干净)

2. 再加入 400ul 预冷缓冲液 A 到 EP 管里继续研磨，至匀浆状。开盖-20 度冰箱孵育 15-20min。孵育后将所 有细胞裂解物倒入离心管套管里。

3. 盖上盖子，立刻 800xg，离心 5min。弃去离心管柱，小心将收集管里的上清去除。沉淀用 500ul 预冷的 PBS 上下吹打 20-30 次，直至将沉淀打散重悬。

4. 600xg，离心 5min。小心去除上清，加 200ul 预冷 PBS 重悬沉淀，留做下一步使用。

5. 将 1ml 预冷的缓冲液 B 加到一个新的 1.5ml EP 管里，将 200ul 第 4 步 PBS 重悬液用移液器小心贴着管壁缓慢吹出到缓冲液 B 的上方。800xg，离心 10min。离心后，细胞碎片和磷脂类会留在最上面（乳状层）。下方的沉淀为纯化的细胞核。用吸头将乳状层小心吸出丢弃，倒掉残留的缓冲液 B，用 50-200ul 含有5%BSA 的 PBS 或者其他合适的缓冲液将细胞核沉淀重悬。确保将管壁也冲洗干净得到所有的细胞核。

储存条件

4℃下储存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！