• 说明书丨HR132A-+MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒.pdf

产品信息 

产品描述

 MTT分析法以代谢还原噻唑蓝3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide(MTT)为基础。活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶，可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色的甲臜（Formazan），死细胞此酶消失，MTT不被还原。用DMSO溶解Formazan后可用酶标仪在490nm波长处检测光密度。

产品性质

注：5×MTT溶液收到后建议分装保存到-20℃，避光保存，一年有效。

使用方法

1. 在96孔板加入细胞100µL/孔（约1×10⁴），置37℃5%CO₂细胞培养箱培养24小时。
2. 加入适当浓度的受试化合物。
3. 将96孔板在37℃，含5%CO₂空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4. 将 5×MTT用Dilution Buffer 稀释成 1× MTT。
5. 每孔加50µL1×MTT，在 37℃孵育4小时，使MTT还原为甲臜。
6. 吸出上清液，每孔加150µLDMSO使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7. 酶标仪在490nm波长处检测每孔的光密度。

运输和保存

-20℃避光保存一年。

结果分析

1. 细胞的存活率：

将各测试孔的OD值减去本底OD值（完全培养基加 MTT，无细胞）或空白药物孔OD值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD值取均数±SD。

细胞的存活率以T/C%表示T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。

细胞存活率%=（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

2. 求出T/C=50%时的药物浓度(IC50)及T/C=10%时的药物浓度(IC90)。

注意事项

1、悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。

2、Formazan 的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。

3、用不同试剂溶解Formazan时，测定的OD值不同：DMSO溶解时，建议在490nm波长下检测；若用含SDS的相关溶剂溶解，建议在570nm下检测。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品！