木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)试剂盒

木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)试剂盒

价格:500

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产品信息

 

产品名称

测定方法

产品编号

规格

木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)试剂盒

分光光度法

HRK2835

50管/48样

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义

 

木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

 

测定原理

 

木质素过氧化物酶催化天青脱甲基,在651nm处测定吸光值减少。

 

自备实验用品及仪器

 

天平、研钵、低温离心机、分光光度计、1 mL玻璃比色皿、可调式移液器、冰。

 

试剂组成和配制

 

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入80mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存1个月。

试剂二:液体12mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体12mL×1瓶,4℃保存。

 

酶液提取

 

1.组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

2.细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体:直接检测。            

             

测定操作

 

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至651nm,蒸馏水调零。

2、临用前按每个样本试剂一:试剂二:试剂三= 400:200:200(μL)的比例配制工作液,现配现用。

3、在1mL玻璃比色皿中依次加入如下试剂

 

测定管

样品(μL)

200

工作液(μL)

800

充分混匀,立即测定651nm处10s和130s吸光值,记为A1和A2,△A=A1- A2

 

酶活计算公式

 

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。

LiP活性(U/mg prot)= ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.02÷T =125×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每g组织在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。

LiP活性(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.02÷T =125×ΔA÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。

LiP活性(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.02÷T =0.25×ΔA

4.按照液体体积计算

酶活性定义每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。

LiP活性(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.02÷T =125×ΔA

V反总:反应总体积,1mL;V样:反应中样本体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min

注意事项

本产品仅作科研用途!

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