价格:800
货号高铁还原酶(ferric-chelate reductase,FCR)试剂盒
产品详情
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产品信息
产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
高铁还原酶(FCR)试剂盒 |
分光光度法 |
HRK2846 |
50管/48样 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
高铁还原酶(ferric-chelate reductase,FCR)催化高价铁螯合物中的Fe3+还原为Fe2+,在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。
测定原理
FCR催化Fe3+还原为Fe2+,Fe2+和ferrozine反应显色,在562nm下有特征吸光值。
自备用品
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃避光保存;
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃避光保存;
试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取
按照组织质量(g):水mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至562nm,蒸馏水调零。
2.工作液配制:将试剂一、二、三以1:1:1的比例混合。临用前配制,用多少配多少
3.在1mL玻璃比色皿中,加入250μL样本上清和750μL工作液,混匀,记录初始吸光值A1和30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。
FCR活性计算公式
标准曲线:y = 8.0014x + 0.0011,R2 = 0.9997;
-按样本质量计算
单位定义:每g样本每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR(nmol/min/g 鲜重)=(△A-0.0011)÷ 8.0014×1000×V标÷(V样÷V样总×W)÷T= 4.166×(△A-0.0011)÷W
-按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg蛋白每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0011)÷8.0014×1000×V标÷(V样÷V样总×Cpr)÷T=4.166×(△A-0.0011)÷Cpr
V样总:加入提取液体积,1 mL;V样:反应中样品体积,250μL;V标:加入标准品体积 ,250μL;T:反应时间,30min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;1000,μmol到nmol的转换系数。
注意事项
本产品仅作科研用途!