• HRK19035-活性污泥酸性蛋白酶试剂盒(分光光度法）.pdf

产品信息

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理

酸性条件下，S-ACPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。

所需仪器及设备

可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水

试剂组成和配置

试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入100uL试剂七使粉剂润湿，然后加入20ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；（可在烧杯上盖一层保鲜膜，注意观察，避免水分全部蒸发，一般加热15-30分钟，该试剂为过饱和试剂，充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用）。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入50ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；

试剂六：液体1.5mL×1支，50μg/ml标准酪氨酸溶液，4℃保存；

试剂七：液体1.5mL×1支，4℃保存；

样品处理

胞外酶：取1mL样本，8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

胞内酶: 取1mL样本，8000g 25℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL蒸馏水，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

测定操作

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、试剂二、三和四40℃水浴10min。

3、样本测定：

混匀，40℃水浴30min，振荡5-6次，使土样与反应液充分接触

混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液

混匀，40℃水浴20min，680nm下读取各管吸光值A

注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-ACPT活性计算

1.按样本体积计算

单位定义：每min每mL样本产生1μg酪氨酸为一个 S-ACPT活力单位。

S-ACPT(μg/min/mL)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷V样÷T=35×(A测定管-A对照管)÷A标准管

2.按样本蛋白浓度计算

单位定义：每min每mg组织蛋白产生1μg酪氨酸为一个 S-ACPT活力单位。

S-ACPT(μg/min/ mg prot)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷V样÷T÷Cpr =35×(A测定管-A对照管)÷A标准管÷Cpr

C标准管：标准管浓度， 50μg/mL；V反总：反应体系总体积，0.42mL；T：反应时间，30min； V样：样本体积，0.02mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项

本产品仅作科研用途！