价格:550
货号锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒
产品详情
产品详情
产品信息
产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
锰过氧化物酶(Mnp)试剂盒 |
分光光度法 |
HRK2833 |
50管/48样 |
正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
测定原理
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一:液体75mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体11mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取
1.组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体:直接检测。
测定操作
1.分光光度计预热30min以上,调节波长至465nm,蒸馏水调零。
2.测定前将试剂一、二、三、四在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上。
3.样本测定表
试剂名称(µL) |
测定管 |
样本 |
100 |
试剂一 |
500 |
试剂二 |
100 |
试剂三 |
200 |
试剂四 |
100 |
在1 mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。
注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上,测定时加入100µL样本和900µL混合液测定。
酶活计算公式
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/g 鲜重)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×W÷V样总)÷T= 413×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义:每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T= 413×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义:每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T= 413×ΔA
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1×10-3L;V样:反应中样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min
注意事项
本产品仅作科研用途!