锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒

锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒

价格:550

货号

产品详情

产品详情

 

产品信息

 

产品名称

测定方法

产品编号

规格

锰过氧化物酶(Mnp)试剂盒

分光光度法

HRK2833

50管/48样

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义

 

锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。

 

测定原理

 

锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。

 

自备实验用品及仪器

 

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。

 

试剂组成和配制

 

试剂一:液体75mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体11mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存。

 

酶液提取

 

1.组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

2.细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体:直接检测。     

                  

测定操作

 

1.分光光度计预热30min以上,调节波长至465nm,蒸馏水调零。

2.测定前将试剂一、二、三、四在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上。

3.样本测定表

试剂名称(µL)

测定管

样本

100

试剂一

500

试剂二

100

试剂三

200

试剂四

100

在1 mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上,测定时加入100µL样本和900µL混合液测定。

 

酶活计算公式

 

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/g 鲜重)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×W÷V样总)÷T= 413×ΔA÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T= 413×ΔA÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T= 413×ΔA

ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1×10-3L;V样:反应中样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min

注意事项

本产品仅作科研用途!

{{ data.nameCh }}
价格:
下单可获得 {{ integral }} 积分
运费:全国包邮 浏览量:{{ data.viewCount + 1 }}
货号:
{{ choseAttributeData && choseAttributeData.specsArtNo || ' ' }}
规格:
{{ item.productSpecs }}
数量:
说明书及质量管理:
{{ item.name }}{{item.num}}
欢迎对本产品留下宝贵意见,我们将认真听取您的呼声
  • {{ item.name }}