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 产品信息

产品说明

      HRbio™ SuperFect Transfection Reagent 是一种基于高分子阳离子聚合物的新型转染试剂，适用于 DNA、RNA 的转染。其原理为带正电的高分子聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后，与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞，随后在胞质中释放，实现外源核酸的细胞转染。 HRbio™ SuperFect Transfection Reagent 对多种常见细胞具有高水平转染效率，具有高效低毒、操作简单、重复性好等优点。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。同时，转染后不需要除去 HRbio™ SuperFect Transfection Reagent-核酸复合物或更换新鲜培养基，也可根据具体情况优化转染体系。

产品特点

1）卓越的转染效率——针对广泛类型的细胞，均表现出卓越的转染效率和高重组蛋白表达水平

2）细胞毒性低——作用温和，能较好地实现高转染效率与低细胞毒性之间的平衡 

3）操作简单——在血清存在时亦具有可靠的转染效率，转染后无需去除复合物或更换新鲜培养基

4）高性价比——经济的价格，同时实现高效的转染效果

适用范围

HRbio™ SuperFect Transfection Reagent采用高分子阳离子聚合物为主要成分，适用于DNA、RNA 的转染。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期6个月。-30℃至-10℃保存，有效期12个月。

注意事项

1）核酸质量：想要获得最高的转染效率和最低的细胞毒性，应选用高纯度、无菌、无污染、无内毒素的优质核酸。质粒中的内毒素是转染的大敌，内毒素会导致转染效率显著下降，特别是对内毒素敏感的细胞，例如原代细胞、悬浮细胞、造血细胞等。推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒进行质粒提取（货号：HRN0651或者HRN0031），保证质粒 A₂₆₀/A₂₈₀ 比值为 1.8-2.0。同时，需合理计算质粒用量，转染过量的质粒可能会导致细胞毒性甚至死亡。

2）细胞质量：细胞状态会极大影响转染效率，建议使用生长处于指数期、存活率大于90%的细胞进行转染。

3）细胞密度：建议细胞传代后12-24 h内、细胞密度为60%-70% 时进行转染。不同的细胞转染实验，对细胞密度的要求不尽相同。在进行不同核酸或不同细胞系的转染时，需要根据说明书再次优化实验条件。此外，在实验过程中保证相同的接种条件， 确保实验数据的可重复性。

4）质粒与转染试剂使用比例：对于大多数细胞系，转染复合物中DNA (μg)与PHRbio™ SuperFect Transfection Reagent (μL) 的比例在 1：2 至 1：4 之间，推荐比例为 1:2.5。想要获得最优的转染结果，需要对这一比例进行优化，根据所转染细胞及质粒选择适合的转染比例。

5）HRbio™ SuperFect Transfection Reagent可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是制备转染复合物时要求用无血清基础培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。

6）由于一些特殊培养基中的某些成分可能会抑制阳离子聚合物介导的转染，因此有必要检测特殊培养基与HRbio™ SuperFect Transfection Reagent的相容性。

7）为了您的健康安全，请规范操作，穿戴实验服与手套开展实验。

8）本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及治疗。

实验流程

图 1: HRbio™ SuperFect Transfection Reagent 转染实验流程图

使用方法

（以 24 孔板为例，其他培养板加样体积参考表一：转染量度标准）

1.准备待转染细胞

贴壁细胞：转染前一天，将胰酶消化后的细胞按照每孔0.3-2×10⁵个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为 60%-70%。

悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，在24孔板中进行细胞铺板，每500 µL生长培养基中加入2-5×10⁵个细胞。 

细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态，建议使用生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。

2.准备 HRbio™ SuperFect转染试剂-核酸复合物

（1）取1 μg质粒加入到1.5 mL离心管中，加入2.5 μL * 的HRbio™ SuperFect转染试剂与质粒混合，室温孵育3 min。 

* 转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，通常情况下，DNA（μg）和 HRbio™ SuperFect转染试剂（μL）的用量比例为1：2.5。建议初次使用时，可在1：2-1：5的范围内调整以优化转染效果。

（2）往上述混合物中加入100 μL无血清基础培养基（与培养体系一致，且无血清无双抗），轻轻混匀，在室温下静置30 min，形成 HRbio™ SuperFect转染试剂-核酸复合物。 Ø

HRbio™ SuperFect转染试剂-核酸复合物在室温下4个小时内保持稳定。

3.细胞转染

将上述100 µL HRbio™ SuperFect转染试剂-核酸复合物加入每孔细胞，轻轻摇动培养板混匀。

对于悬浮细胞系：转染5小时后，可选择加入PMA和/或PHA以提高CVM启动子的活性并促进基因表达。对于Jurkat细胞，PHA和PMA的终浓度分别为1 µg/mL和50 ng/mL，可以提高CMV 启动子活性和基因表达。对于K562细胞，只加入PMA足以提高启动子活性。

4.分析转染细胞

转染细胞培养24-48小时后，可根据实际情况用荧光检测法、Western Blot、RT-PCR、ELISA、流式细胞术、报告基因等检测转染效果，或加入筛选药物进行稳定细胞株的筛选。

实验案例分析

1.转染前一天，将图2所示9种状态良好的细胞接种于24孔板，使其在转染时密度为60%-70%。

2.按照每孔计量，取1μg GFP质粒加入到1.5 mL离心管中，加入2.5 μL 的HRbio™ SuperFect转染试剂与质粒混合，室温孵育3 min后，往混合物中。加入100 μL无血清基础DMEM培养基，轻轻混匀，在室温下静置30 min，形成HRbio™ SuperFect转染试剂-核酸复合物。

3.将上述100 µL HRbio™ SuperFect转染试剂-核酸复合物加入每孔细胞，轻轻摇动培养 板混匀。

4.转染细胞培养 48 小时后，用荧光显微镜检测 GFP 绿色荧光蛋白表达情况，并拍照记录，实验结果如图 2 所示。

图 2: 转染细胞培养48小时后，用荧光显微镜检测GFP绿色荧光蛋白表达情况