oligo-dT磁珠

价格:2,499

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产品详情

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格/元
oligo-dT磁珠	L-3002	2mL	¥2499
oligo-dT磁珠	L-3002A	5mL	¥4999

产品描述

本产品用于从总RNA或直接从动物组织、植物或细胞中快速分离出高纯度且完整的mRNA。可以广泛的应用到各种样品中。磁珠上的oligo-dT与mRNA的polyA杂交。操作简单易行，仅需几步洗脱和磁分离，所有操作都在单管中一次完成。磁操作最大的优点就是容易清洗、分离以及浓缩磁珠结合的材料。

项目	特性
粒径	200 nm
结合能力	~10 ug mRNA/mg磁珠
浓度	10 mg/mL
保存液	0.1 M Tris-HCl，pH 7.5, 20 mM EDTA，含0.1%（v/v）Tween -20，0.1%（w/v）NaN₃
保质期	在2-8°C稳定保存，保质期两年

储存条件

在2-8℃稳定保存，保质期两年。

使用说明

1. 磁珠预处理

（1）将磁珠悬液漩涡振荡30 s，使磁珠充分震荡重悬；

（2）取出100 μL磁珠悬液至合适的反应管（1.5 mL EP管或PCR管）中；将反应管置于磁性分离器上，待溶液变澄清后【后续该操作简称为“磁性分离”】，移去上清液，从磁性分离器上取下反应管；

（3）加入1mL结合缓冲液重悬磁珠，用移液器缓慢吹打5~10次或漩涡震荡30 s。

（4）磁性分离，去上清，加入100 μL结合缓冲液重悬磁珠。

2. 样品前处理

（1）动物/植物组织

a.将所需量的植物或动物组织快速并完全均质化在液氮中。

b.将冷冻粉收集并转移到新鲜的管中。每100毫克组织添加1mL结合缓冲液，充分混匀，并在室温下旋转混合5分钟。

c.通过用针头通过数次的吸入和吸出剪切DNA来降低溶液粘度。

d.在室温下以14,000rpm离心5min，并将所有上清液转移至一个新鲜的EP管。上清液可以进行mRNA纯化，或保存在-80℃以备将来使用。

（2）细胞悬浮液

a.室温下以4,000rpm离心5min沉淀细胞并丢弃上清液。每5-10x10⁶个动物或植物细胞加1ml结合缓冲液。

b.通过移液多次溶解细胞直至溶液变粘稠。通过用针头通过数次的吸入和吸出剪切DNA来降低溶液粘度。

c.在室温下以14,000rpm离心5min，并将所有上清液转移至一个新鲜的EP管。上清液可以进行mRNA纯化，或保存在-80℃以备将来使用。

3. 提取mRNA

a.制备动物/植物组织裂解液或从培养细胞和细胞悬浮液中制备裂解液。

b.按照“一、磁珠预处理步骤”对磁珠进行处理。

c.将裂解液与磁珠混合，室温下旋转混合3-5分钟。

d. 磁性分离，静置2min, 去上清。

e. 室温下分别用1ml洗涤液Ⅰ和1ml洗涤液Ⅱ清洗磁珠，去除可能的污染物。

f. 如果分离mRNA用于酶促下游应用（例如固相cDNA合成），洗涤液Ⅱ（500μL）洗涤一次，随后用酶缓冲液洗涤一次，可用于下游应用。

如果从磁珠中洗脱mRNA，洗涤液Ⅱ洗涤后并加入10～20μl 10mMTris-HCl,75°C-80°C孵育2分钟，然后快速将含有mRNA的上清液转移到新的RNase-free EP管。

4. Total RNA中纯化mRNA

以纯化75ug Total RNA为例

a. 取100ul含有75ug Total RNA 与100ul结合缓冲液混合，

b. 65°C孵育2min,打开RNA二级结构，结束后迅速置于冰上。

c. 将上述混合液室温下旋转混合3-5分钟。

d. 磁性分离，静置2min,去上清。

e. 室温下分别用1ml洗涤液Ⅰ和1ml洗涤液Ⅱ清洗磁珠，去除可能的污染物。

f. 加入10～20μl 10mM Tris-HCl,75°C-80°C孵育2分钟，然后快速将含有mRNA的上清液转移到新的RNase-free EP管。

常见问题及对策

发生问题时，请参照以下的对策。

1.RNA的回收量低

原因	对策
样品保存状态欠佳	在采取完样品材料后请立即冻结·保存。
溶解处理不充分	样品在溶解液内溶解时，请充分匀浆，并使其通过装有注射针的针筒以降低粘性。另外，对于组织，请事先进行充分的冻结破碎工作。
样品过于坚硬	请充分进行冻结破碎，或进行匀浆。
样品量过剩	样品量过剩时，会使粒子凝集，粘性变高，回收量下降。请降低样品量。
样品中所含RNA量过少	请通过AGPC法等其他方法对大量的样品进行处理，以制备Total RNA，并使用本试剂盒制备mRNA。

2. RNA被分解

原因	对策
样品保存状态欠佳	在采取完样品材料后请立即冻结·保存。
冻结样品在使用前已经融解	样品尽可能保存在液氮中，使用时请迅速放入溶解液中溶解。
混入Rnase	请戴上手套和口罩。另外，请避免和使用RNase的其他实验使用同一个器具及场所等。
对RNA加温处理	如果RNA在反应缓冲剂中长时间加温则会分解。若需要长时间加温，请使用添加了RNase Inhibitor的反应缓冲剂。另外，加温时请尽量控制温度在72℃以下。

3. RNA的纯度低

原因	对策
样品量过剩	请考虑减少样品量。
试剂还没有完全回复到室温状态	对于酶以外的试剂请先待其回复到室温后再加以使用。
洗净时的磁珠混合不充分	仅通过倒转混合有时并不能充分混匀。在没有使用漩涡混合器的情况下，请通过pipetting进行混合。

4. RT-PCR结果不良

原因	对策
混入基因组DNA	已证实在没有进行DNase I 处理的情况下特别容易混入基因组DNA。请先进行DNase I 处理。另外，在进行RT-PCR时，推荐对未进行逆转录反应的样品也进行PCR操作，以便确认来自基因组DNA的增幅产物是否存在。
RNA的分解	参照相关操作程序 [9] 2.
洗净不充分	溶解液中含有蛋白变性剂。请对溶解液充分洗净，并仔细去除上清液。如果觉得溶出后的样品内混入了蛋白变性剂（若A₂₆₀/A₂₈₀的数值变高），请在酶反应前进行乙醇沉淀。

5. 磁珠凝结，无法分开

原因	对策
溶解处理不充分	样品溶解时，请透过装有注射针的针筒。根据样品的破碎状态，此项操作可能会比较困难。这种情况下请通过pipetting来降低液体的粘性。
样品量过剩	如果处理时样品量过剩，就可能引起粒子凝集，回收量低下。请考虑减少样品量。

注意：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序，不能使用本产品作为食品、化妆品或家庭用品等。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！