• 说明书丨HRD0034-HRbio™ 预染三色蛋白质分子量标准Marker(10-310kDa).pdf

产品信息:

产品描述：

       HRbio™ 预染三色蛋白质分子量标准Marker(10-310kDa)是超大范围的蛋白质标准品，该标准品中包含了13种预染色的标准蛋白质，在Tris-gly缓冲液体系中，分子量范围是：10-310kDa，在Bis-Tris（MOPS）缓冲液体系中，分子范围是：9-290kDa。本产品适用于 SDS-PAGE 电泳时变性蛋白样品的分子量参照，并可实时观察蛋白样品的电泳分离状况；也可用于检测 Western blot 的转膜效率。由于共价结合的染料会影响蛋白质分子的电泳迁移率，本产品可用于粗略的估计目的蛋白样品的分子量。

运输和保存方法：

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年，4℃保存，有效期3个月。

使用说明：

1.将本产品于室温融化后，轻轻混匀，使沉淀充分溶解。

2.上样 5μL，SDS-PAGE电泳过程及转膜后可呈现清晰的彩虹条带。

3.建议依据待测蛋白分子量选择合适的分离胶浓度。

注意事项：

1.使用时应该将从低温取出后的产品恢复至室温后混匀再上样；否则可能由于低温下蛋白变性不彻底，从而导致电泳条带出现不同程度的弥散或拖尾。

2.转膜效果与转膜时间有关，需根据客户目的条带大小而定，如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功，属于正常现象。

3.本产品含有 SDS，蛋白已变性，不宜作为天然蛋白分子电泳时的分子量参照标准。

4.本产品应避免反复冻融，建议分装保存。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6.本产品仅作科研用途！

附：

图1.不同浓度SDS-PAGE胶电泳结果图（Tris-Glycine体系）

图2.不同浓度SDS-PAGE胶电泳结果图（Bis-Tris）

常见问题：

一、为什么使用不同品牌的蛋白质标准品，测定分子量的结果会有所不同？

答：A. 不同的蛋白质即使分子量相近，由于蛋白质的氨基酸组成不同（例如明胶），其SDS-PAGE结果也会有明显的差异。差异的原因在于氨基酸组成会影响蛋白质与 SDS 的结合。因此，我们可以说蛋白质 marker 是估算分子量的便捷工具，但没有绝对的分子量标准。 

B. 在运行 SDS-PAGE 时，蛋白质迁移率会受到所用缓冲液成分、凝胶百分比、所用电压、运行时间以等的影响。 

C. 对于高分子量蛋白质的另一个建议是延长运行时间以明确条带的相对位置。

二、蛋白marker可以冻融几次？如果每次用量为5μL，总用量是50次x 2（250μL x 2 管）吗？ 

答：是的，如果在适当的温度下仔细正确地进行冷冻和解冻，预计可以使用 100 次（每次 5 μL）。每次使用前，请确保蛋白已彻底解冻。 

三、有蛋白质分子量与其他蛋白质标准的精度数据比较吗？

答：通常预染色marker上会写上“估计分子量”，以防万一。通过 SDS-PAGE 分析蛋白质大小仅用于“估计”，因为所有蛋白质（包括染色和未染色的蛋白质）的氨基酸组成都存在内在差异。例如，与疏水性蛋白质相比，亲水性强的蛋白质在 SDS-PAGE 分析中可能显示特定的较高位置。我们将蛋白质marker的迁移模式与其他品牌进行了比较，并得出结论，由于上述原因，很难定义“精度”。因此，在产品说明中，我们建议用户根据他们感兴趣的蛋白质校准MW。虽然无法定义 SDS-PAGE 中蛋白质分子量的“精度”，我们确实将预染marker的迁移模式与未染蛋白marker进行了比较，以进行校准。结论是，我们的marker的估计分子量显示出与未染天然蛋白质的曲线非常匹配，代表在 SDS-PAGE 分析中对每个预染蛋白质的 MW 进行了很好的估计。

四、marker在蛋白质印迹过程中会被洗掉吗?

答：marker在Western blotting 过程中仅会被轻微洗掉，但清洗缓冲液中过量的 Tween-20（超过 0.2%）会影响转印膜上的Markers。

以下是 Western blotting 操作步骤建议：
1. 使用含 20% 甲醇的转移缓冲液将Markers转移到膜上，以将Markers固定在膜上。 
2. 使用含少于 0.1% Tween-20 的 PBS 或 TBS 清洗膜。 

五、在存在 β-巯基乙醇 (β-ME) 的情况下，marker会受到剥离液清洗过程的影响吗？

答：正常情况下，抗体剥离过程中β-ME的存在对Markers的影响不大，但剥离过程中PVDF膜上Tween-20的存在对Markers有不利影响。