产品信息

产品描述

TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，中文全称3,3',5,5'-四甲基联苯胺，是辣根过氧化物酶（HRP）的常用显色底物之一。在HRP的催化下，TMB被过氧化氢（H₂O₂）氧化生成蓝色产物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸终止上述反应后，产物转变为黄色，最大吸收峰为450 m。

      外观与结构：显色液A应为无色或淡黄色透明液体，显色液B应为无色透明液体。均无沉淀、颗粒及絮状物。

      用于酶联免疫实验中的显色阶段：可于样本反应，生成深蓝色产物。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃避光保存，一年有效。

注意事项

1）TMB对人体有刺激性，请注意适当防护。

2）正常情况，显色液A应为无色或淡黄色透明液体，显色液B应为无色透明液体。均无沉淀、颗粒及絮状物。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1）加液：待样品孔中加完HRP结合物并孵育一定时间后，用适当洗涤液洗板3-5次，每孔加底物显色液A、显色液B各50ul（A、B液先混合再加入孔中），轻轻混匀，根据个人实验需要，在室温（15-25℃）或37℃下避光温育10-30分钟或更长时间，直至显色至预期深浅。
2）终止：每孔加入等体积的1M 盐酸或硫酸溶液终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。
3）读数：终止反应后15分钟内在450nm处测定各孔溶液的吸光值。
4）对照：空白对照不加HRP标记的抗体/抗原和阴性对照结果应无色。阳性对照及加HRP标记的抗体/抗原产生深蓝色产物。
注意：如果出现高的反应背景或沉淀，表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀，可在终止后马上读数；或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。

常见问题

1. 背景显色太深

1）如果背景（没有样品的对照）显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，如商业化的封闭液或者商业化的和一抗相同来源的血清（5-10%）进行封闭。另一方面，直接使用经过适当亲和吸附的二抗，以减小二抗的非特异性交叉吸附。

2）可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

3）可考虑TMB底物本身反应过于强烈。为了避免沉淀的产生，可在终止反应后马上读数，或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。

2. 没有显色或显色太弱

1）适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否被正常显色。

2）可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

3）可以适当延长显色时间。

4）如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。