• Minute™突触体分离试剂盒 SY-052_CN.pdf

产品信息

产品描述

      从神经元组织/培养细胞中分离突触体对于理解神经系统疾病的机制至关重要。突触体中含有直径为80-200nm 的突触小泡，这些突触小泡在信号传输中起重要作用。传统分离突触体是使用密度超高速离心方法，步骤相对繁琐和耗时，且起始样品量需求高。Minute™ 突触体分离试剂盒是一种简单、快速可从新鲜/冷冻的神经元组织/培养细胞中分离突触体的方法。本试剂盒不使用杜恩斯均浆器和超高速离心机，仅需约10-50mg 起始样品, 操作过程不到1 小时即可完成突触体的分离。本试剂盒使用无表面活性剂的缓冲体系，可获得天然的突触体相关蛋白。

使用说明

1. 将离心管柱及接收管套管放置冰上预冷,在冰上预冷 buffer A 和 buffer C。

2. 脑组织样品，将约 30mg 新鲜或冷冻组织（每种组织的量可在 10-50mg 范围）放置于离心管柱上。加入 200ul Buffer A，用塑料棒反复扭转按压研磨组织 1-2 分钟。再加入 300 ul Buffer A 混 匀，转接步骤 3 注意：塑料棒是重复使用的，可以用 70%的酒精或者水清洗。

细胞样品：低速离心（500-600Xg，5 分钟）收集 30-40x 106 个细胞。用 1ml 预冷的 PBS 清洗一次细胞，完全去除上清，加 500 ul Buffer A 重悬细胞，在冰上孵育 5 分钟，用力涡旋震荡10-30 秒。迅速将细胞悬液转入离心管柱中。转接步骤 3.

3. 盖上盖子，翻转几次，16,000X g，离心 15-20 秒。（此步骤需离心机快速升速，10s 内到达16000Xg 可提高得率）（可选优化步骤：细胞样品过柱之后，可以再次重悬细胞，转移回同个离心管柱中再次过柱，可以增加产量）

4. 弃去离心管柱，大力涡旋震荡 10S 重悬沉淀，1500X g，离心 5min（沉淀包含细胞核，大的细 胞碎片和一些未破碎的细胞）。将上清转移到新的 1.5ml 离心管中，加入 50ul buffer B 振荡20-30s 混匀后，13000X g，离心 15min。完全去除上清（上清是胞浆组分）。 5. 沉淀中加入 500ul 预冷的 Buffer C，用吸头反复吹打重悬沉淀。冰上孵育 5min 后，剧烈振荡10-20s 混匀，2000xg，离心 5min（沉淀主要是质膜和一些脂质）。小心的将上清转移至一个新的离心管中。 6. 13000X g 离心 20min，沉淀即是分离的突触体。沉淀可根据下游应用选购以下溶解液重悬沉淀。根据起始样品量和沉淀量使用 100-300ul 溶解液吹打溶解即可。

储存条件

4℃下储存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！