产品信息

产品描述

胶原蛋白（Collagen）是结缔组织和内脏器官外基质的主要成分，但在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。胶原蛋白在结构和遗传学上被分为不同类型，I型胶原蛋白（Collagen, Type I）结构上是由2个α1链和1个α2链组成300nm长的异源多聚体。当用作凝胶时，胶原蛋白有助于体外培养并增强细胞特异性形态和功能的表达。胶原蛋白也可用于薄层以促进附着，应用包括研究肿瘤细胞侵袭和迁移，单核细胞，巨噬细胞的培养或分化研究，以及粒细胞和巨噬细胞的放射自显影研究。胶原I还用于维持肝细胞功能，分化状态和肝细胞基因转录水平的升高等研究。

本品是来源于鼠尾，溶于无菌0.006M HAc溶液，浓度为5mg/mL，通过SDS-PAGE测定纯度大于90%，无菌。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期1年。不可冻存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）整个操作请于冰上进行，因室温下胶原蛋白I可迅速成胶。

3）整个操作请在无菌环境下无菌操作，避免污染以影响细胞生长。

4）本产品仅作科研用途！

使用说明

1、细胞培养器皿的表面包被，推荐浓度：1-5μg/cm²，以包被2μg/cm²为例：

1）用无菌0.006M HAc溶液将胶原蛋白I稀释到0.012mg/mL,按下表加入相应的体积

2）确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。也可以在室温放置1小时后，用PBS反复洗涤3-4次后直接使用。包被好的器皿在4-25℃温度下至少可以保存3个月以上。

2、三维胶原的制备：

1）鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/mL以上，pH7左右时，可形成有一定强度的三维胶，成胶浓度1-2mg/mL。先用胶原蛋白溶解于0.006M的HAc溶液中，在成胶过程中需要加入0.06倍体积的0.1M氢氧化钠来中和。

2）需要准备的溶液（所有溶液均需无菌和预冷）：10×PBS（可含有10mg/L的酚红用来指示pH）或10×培养液、0.1M NaOH。

3）鼠尾胶原蛋白I在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。

A）不含细胞的三维胶原的制备，以配制1mL，1mg/mL三维胶为例；

    1.将200μL鼠尾胶原蛋白I(5mg/ml)加入冰浴处理的离心管中，加入 690μL H₂O

    2.加入12μL 0.1M NaOH中（顺序不能颠倒，即不可将NaOH溶液加入到胶原蛋白中，否则会因为NaOH溶液不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。

    3.加入100μL 10×PBS或者10×培养液，混匀后立即加入到培养器皿中（混匀后的pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测量）。

    4.将培养器皿在室温（约25℃）放置20min，待胶凝固后转移到培养箱中（如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。）

B）含细胞的三维胶原的制备，以配制1mL，1mg/mL三维胶为例；

    1.准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。

    2.将200μL鼠尾胶原蛋白I(5mg/ml)加入到12μL 0.1M NaOH中（顺序不能颠倒，即不可将NaOH溶液加入到胶原蛋白中，否则会因为NaOH溶液不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。

    3.加入23μL的10×PBS或者10×培养液，混匀（混匀后的pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测量）。

    4.加入760μL的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。

    5.将培养器皿在室温（约25℃）放置20min，待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。