价格:280
货号蔗糖酶（sucrase）试剂盒
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
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蔗糖酶（sucrase）试剂盒 |
分光光度法 |
HRK1517 |
50管/24样 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
测定原理
本试剂盒采用3.5－二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5－二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
所需的仪器和用品
可见分光光度计、沸水浴、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体2.5mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1支 ，4℃保存，用时加入1.5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂4℃保存；
试剂三：液体5mL×1瓶，常温保存；
样品测定的准备
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
加样表和测定步骤
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试剂名称（μL） |
对照管 |
测定管 |
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试剂一 |
50 |
50 |
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蒸馏水 |
50 |
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样本 |
100 |
100 |
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试剂二 |
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50 |
置于25℃准确水浴10min
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试剂三 |
100 |
100 |
混匀， 95℃水浴5min左右（盖紧，防止水分散失），冷却至室温
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蒸馏水 |
700 |
700 |
混匀，520nm蒸馏水调零，测定各管吸光值，ΔA=A测定-A对照，每个测定管设一个对照管。
蔗糖酶活力计算
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.1296x -0.12；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。
1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
注意事项
本产品仅作科研用途！