产品信息

产品描述

Streptavidin Agarose Resin 6FF是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂，其作用原理是基于链霉亲和素与生物素之间的相互作用，将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上，独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，纯化时需要在变性条件下洗脱；而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在 pH 9.5-11.0 结合，pH 4.0 时洗脱，不需要使用变性剂，所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 m或0.45 m滤膜过滤除菌。

生物素或生物素化物质的纯化

结合/洗杂缓冲液：150 mM NaCl，20 mM NaH2PO4，pH 7.4

洗脱缓冲液：8 M盐酸胍，pH 1.5

亚氨基生物素标签物质的纯化

结合/洗杂缓冲液：50 mM碳酸铵，0.5 M NaCl，pH 10.0

洗脱缓冲液：50 mM碳酸铵，0.5 M NaCl，pH 4.0

使用方法

注：样品在上样前最好用0.22 m或0.45 m滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。另外，确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1. Streptavidin Agarose Resin 6FF的装填（适用于各种中压色谱层析柱的填装）

1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。

2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。

4）打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速， 这样可避免液压对所形成柱床的冲击，避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。

注：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%，当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

5）关闭泵，关闭层析柱出口。

6）如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。

7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。

8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

2.样品纯化（以KTA为例）

1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。

3）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。

4）洗脱：使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液，收集洗脱液，即目的蛋白溶液。

5）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

3 .SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

【注】由于盐酸胍的带电性强，会中和SDS的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析（透析可利用透析袋，PBS作为透析液，透析两次，每次1小时，透析液的体积可控制在样本的100倍）。

4.填料清洗

随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的0.1 M NaOH或6 M盐酸胍或8 M尿素溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！