• 说明书丨HRF0404-EcroI.pdf

产品信息

产品描述

      EcoRI是一种限制性核酸内切酶，来自大肠杆菌（E. coli ），是大肠杆菌内参与限制修饰系统的酶。EcoRI限制酶能专一识别G^{^}AATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开，切割后的小片段端点为5'端突出的黏状末端。

      本公司生产的EcoRI酶是通过基因重组表达获得的酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。

酶切位点

5' G ↓ A A T T C 3'
3' C T T A A ↑ G 5'

注意事项

1）可在5~15 min 内完成反应；

2）最适反应温度为37℃；

3）受CpG甲基化影响，序列可能重叠，剪切受阻；

4）失活条件为80℃温浴20min；

5）3h温浴未表现星号活性，更长时间酶切可能出现星号活性；

6)本产品仅作科研用途！

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。

产品组成

使用方法

1.DNA快速酶切过程

1）在冰上配制以下反应体系：

3）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

4）37℃温育15 min（质粒），或 30~60 min（基因组 DNA）；

5）80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）；

6）如果使用 10×Color Reaction buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2.双酶切或多酶切

• 每种快速内切酶的用量为1μl，并根据需要适当扩大反应体系；
• 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
• 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。