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产品信息 

产品描述

      本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等细菌的RNA中提取总RNA。只要30min左右即可完成提取，操作简单，使用方便。提取出的总RNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

本细菌RNA快速提取试剂盒通用型强，兼容性好，可广泛使用于各类革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌样本的提取。

产品组分

产品特点

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂等步骤。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取各类革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值高达 2.1～2.2，基本无 DNA 残留，

可用于RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。

运输和保存方法

1、本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2、试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃-25℃）进行。

3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机

2、需要自备乙醇、β-巯基乙醇或者DTT。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA残留或者RNA产量降低

4、RLT和RW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、关于DNA的微量残留：

一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到 100%无残留），本公司的 RNA 提取产品，由于采取了本公司特殊的裂解液体系和离心管吸附柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于RT- PCR 和qPCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

（1）选用跨内含子的引物，以穿过 mRNA 中的连接区，这样 DNA 就不能作为模参与扩增反应。

（2）选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

（3）在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在离心柱上进行 DNase I 柱上消化处理。购买 DNA 酶柱上消化试剂盒(货号：HRN0291)前可先索取具体操作说明书。

6、本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer RW1，Buffer RPE中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

→在使用前加入10μL β-巯基乙醇或20μL的2M DTT到1mL Buffer RLT中，含有β-巯基乙醇或者DTT的裂解液可在室温下保存长达1个月。

→提取细菌RNA之前需先配制加了溶菌酶或溶葡球菌酶的TE缓冲液，浓度为1mg/mL，正常一个样品需要使用100μL的TE缓冲液

1、离心收集1-2mL菌液（10⁸-10⁹细胞）到一个1.5mL离心管，尽可能去除上清。

2、根据细菌的种类和数量，充分重悬细菌在100μL（5×10⁸细胞）/200μL（5×10⁸-7.5×10⁸细胞）TE中（注意：该TE缓冲液需要提前添加溶菌酶或溶葡球菌酶，浓度是：1mg/mL）。

3、室温（15-25℃）孵育5分钟，或者37℃孵育15分钟溶葡球菌酶。每2分钟涡旋振荡10秒促进破壁。

注意：各种细菌破壁的难易程度不一样，一般革兰氏阴性菌使用上面的条件就足够了，甚至可以省略该步骤，但是某些阳性菌难破壁，需要提高溶菌酶浓度或者使用溶葡球菌酶、玻璃珠机械破壁、蛋白酶K消化或者联合使用等方法，需要根据用户自己的具体情况调节酶的工作浓度和温育温度、时间和选择正确的方法。

4、加入350μL（如果上面使用100μL TE/酶）或者700μL（如果上面使用200μL TE/酶）裂解液Buffer RLT，吹打混匀后用手剧烈振荡20秒，充分裂解。

5、组装好gDNA清除柱和收集管，将步骤4的溶液添加到gDNA清除柱中，12,000rpm离心2min。小心将收集管中的上清转移到新的离心管中（不要碰到收集管中的沉淀物）。

6、加入250μL 无水乙醇（如果上面使用350μL RTL管）或者500μL无水乙醇（如果上面使用700μL RTL管），立即吹打混匀。

7、将上述混合物加入到一个新的吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm离心60秒，弃废液，收集管重复使用。

8、加入700μL的 Buffer RW1到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15秒，弃废液，收集管重复使用。

9、加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15秒，弃废液，收集管重复使用。

10、重复一遍，加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心2min（较长时间的离心，确保RNA洗脱过程中没有乙醇残留）

*11、该步骤为可选择步骤，将离心柱装填到全新的2mL收集管中，盖好盖子，12,000rpm离心1min，可完全去除残留的Buffer RPE。

12、将离心柱放置到全新的1.5mL离心管中，向离心柱的膜中央加入30-50μL的无酶水，盖好盖子，12,000rpm离心1min，洗脱收集RNA。

说明：如果预期RNA产量＞30μg，另外再加入30-50μL的无酶水到离心柱中，重复步骤12，合并两次洗脱液；如果需要高浓度的RNA，建议将第一次的洗脱液加回到离心柱上，重复步骤12。

洗脱两遍RNA的洗脱液的RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15-30%，但是浓度要低，使用者根据需要进行选择。