• 说明书丨HRX1342-Celltracker CM-DiI 活细胞示踪剂CM-DiI （红色）.pdf

产品信息

产品描述

CM-Dil为DiI的一种衍生物，通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞，适合监测细胞运动以及细胞定位分析。因具有良好的染料维持性，可用以追踪多次传代细胞的运动特性。其有着强而稳定的红色荧光（Ex/Em=553/570nm），与绿色荧光染料以及蛋白具有良好的荧光分辨性，适合做多重指标染色。CM-Dil可自由穿透质膜进入细胞，从而产生不具有膜渗透性的反应产物。经过几次传代此染料还可完好的维持在活细胞内，染料随着细胞分裂传入子代细胞内，但不会进入相邻细胞。至少在72小时内保持荧光信号（一般可传3~6代）。工作浓度下，此染料无细胞毒性，不会影响细胞活力以及增殖能力。

与Dil相比，CM-Dil水溶性更好一些，便于悬浮细胞和固定细胞染色溶液的制备；CM-Dil携带的CM基团（即氯甲基替代基团）能与多肽及蛋白上的巯基反应从而使该分子在醛类物质中保持稳定。与其他膜染料如DiI和PKH26不同，一些细胞经CM-Dil染色后，可在后续的固定，透化和石蜡包埋处理中维持稳定的标记，因此特别适用于同时做细胞膜标记以及后续的免疫组化，荧光原位杂交或者电镜观察的实验。

研究证实，CM-DiI标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注入体内，可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。

产品性质

运输与保存方法

室温运输。

产品-20 ℃避光保存，一年有效期。

注意事项

1）荧光染料会存在淬灭问题，注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 染色液制备

1）配置DMF，DMSO或乙醇储存液：储存液用DMF、DMSO或乙醇配制浓度1-2mg/mL。

注：未使用的储存液保存在-20℃，分装保存，避免反复冻融。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或D-PBS）稀释储存液，配制浓度为1～2 μM的工作液。

注：最佳的工作液浓度请根据不同细胞和自身的实验体系来调整。

2. 细胞标记（悬浮细胞）

1）在标记前根据实验要求按照上述方法配制好工作液；

2）建议待标记细胞在染色工作液中于37℃孵育≤5min，再于4℃孵育15min（低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用，有助于染料对质膜的标记，并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性）。

3）标记完成后，用PBS清洗细胞，并用新鲜培养基重悬细胞。

注：对于贴壁细胞，可直接就贴壁状态的细胞进行荧光标记，相较于消化处理后的细胞具有更高的活力。

3. 染色后处理

1）CM-DiI染色后的细胞直接用3.7% 甲醛（溶于PBS），于37℃固定10min；

2）室温条件PBS清洗2次，每次5min；

3）于-20℃中，用丙酮透化处理10min；

4）室温条件PBS清洗2次，每次5min；并根据自身的实验要求以及细胞类型，进行后续的实验如石蜡包埋-免疫组化分析，电镜分析等。有报道提到，经CM-DiI染色后的大鼠嗜铬细胞瘤细胞可兼容2%(w/v)多聚甲醛和0.2%(w/v) Triton X-100的透化作用；从绵阳淋巴细胞内再次纯化的CM-DiI标记细胞，经甲醛固定，石蜡包埋，切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇，以及脱水后仍能维持荧光。