• 说明书HRD5080-苏云金芽孢杆菌（Bt）Vip3Aa 毒素蛋白.pdf

产品信息 

产品描述

Vip3Aa（Vegetative insecticidal protein）是苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）营养期产生的一类对鳞翅目昆虫幼虫具有特异性杀虫活性的毒素蛋白。本产品源自大肠杆菌异源原核表达的带有 Trx 标签及 His 标签的 Trx-His-Vip3Aa融合蛋白，可应用于对鳞翅目昆虫幼虫的生物活性测定及其他相关科研实验工作中。

蛋白杀虫原理

本产品通过基因克隆技术从 Bt 菌株中克隆出 Vip3Aa 基因，并插入表达载体中。利用大肠杆菌进行诱导、表达。表达的蛋白经蛋白纯化流程后获得分子量~108 kDa 的原毒素蛋白单体片段。该蛋白被鳞翅目靶标昆虫幼虫取食后可损伤中肠上皮细胞，在适当剂量下可导致试虫死亡，对非靶标生物没有显著活性。

产品组成

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

注意事项

1）蛋白在多次冻融后可能会存在轻微降解的情况。

2）建议使用 pH=9的碳酸缓冲液梯度稀释蛋白。

3）稀释过程中尽量避免涡旋震荡。

4) 推荐分装后保存在-20℃。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6）本产品仅作科研用途！

检测步骤

以斜纹夜蛾幼虫作为靶标，按照表面涂布法生测，将Vip3Aa 融合蛋白稀释为1.43 μg/cm²、0.57 μg/cm²、0.29 μg/cm20.14 μg/cm2、0.029 μg/cm² 五个浓度梯度。每个杯子（30 mL 塑料杯含有约5 mL食物）的食物表面（约7 cm²）覆盖200 μL 稀释至不同浓度的毒素蛋白，每个浓度设置 5 个重复，阴性对照覆盖200μL ddH2O。待毒素干燥后，每个杯子里放入10只初孵幼虫，将生测杯放入人工气候培养箱（温度 26°C、光周期14 h:10 h（Light:Dark）、相对湿度 60%），每24 h记录一次死亡数，共记录96 h。

质检分析

1、Trx-His-Vip3Aa蛋白 SDS-PAGE 电泳检测

30 μg蛋白经12% 丙烯酰胺凝胶分离后获得~108 kDa 的原毒素蛋白单体条带

2、对斜纹夜蛾初孵幼虫的生测结果

对斜纹夜蛾初孵幼虫的生测结果显示，该产品对敏感品系斜纹夜蛾初孵幼虫的致死中浓度可达0.4 μg/cm²。