• 说明书丨IK-2003His Pull-down 试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

    His Pulldown试剂盒产品能高效捕获和纯化与His-tag融合蛋白相互作用的蛋白实验，无需离心。试剂盒中提供HIS琼脂糖磁珠和磁力架以实现快速便捷的蛋白磁性分离，以及优化配套的缓冲液。

     与基于琼脂糖材料相比，His琼脂糖磁珠进行了优化，能够更高效，更特异性与His-tag融合蛋白进行结合，具有较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更均一，可大幅度缩短实验操作所需的时间。

使用说明

1. 磁珠准备
将 His 琼脂糖磁珠混匀，取 50μL 的磁珠悬浮液，转移至离心管中，放置在磁力架上，磁性分离后弃上清。然后添加 500μL Pull-down buffer，混匀后，然后置于磁力架上，磁性分离后弃上清。（磁珠加入量根据实验要求酌情而定）

2. 样品准备
取 1.5mL 离心管，加入适量的 His-Tag 融合蛋白、待测相互作用蛋白、与上述预处理好 His 琼脂糖磁珠进行混合，同时按比例加入 PMSF，并补充 Pull-down buffer至总体积 500μL。注意：请确保 His-Tag 融合蛋白和待测相互作用蛋白样
品已经过纯化

3. 蛋白结合
将上述混合物，置于翻转混匀仪孵育，4℃、2-8h 或过夜，然后置于磁力架上，磁性分离后弃上清。

4．洗杂
向离心管中加入 500μL Washing Buffer，置于翻转混匀仪孵育 5-10min，然后置于磁力架上，磁性分离后弃上清。重复 3-5 次。(根据结合强度和背景情况增加或减少洗涤次数)

5．蛋白检测
在上述离心管中加入 50-100μL SDS-PAGE SampleLoading Buffer（1×），将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。，之后可通过 Western blot 进行检测或样品保存于-80℃。

可选步骤

SDS-PAGE 检测：将跑好的 PAGE 胶取下放入塑料器皿中，加入适量蛋白快速染色液覆盖 PAGE 胶, 然后置于摇床上摇动，染色时间 0.5h-2h 或过夜均可。染色结束后，PAGE 胶放置于水中保存并拍照。

储存条件

低温运输。

产品优势

1. 具有高效的蛋白结合能力

2. 超低非特异性吸附的性能。

3. 配合磁力架操作省时、简便、温和

4. 产品稳定性高。

注意事项

1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。

2. 磁珠使用前应充分振荡均匀。

3. 磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。

4. 请勿将磁珠冷冻或离心，以免引起不可逆聚集。

5. 本产品仅供研究使用。