• 说明书丨HRQ0621-土壤DNA提取试剂盒(珠磨法).pdf

产品信息 

产品描述

        土壤样品存在大量的抑制因子如腐殖酸、金属离子等，而纯化DNA中只要有这些微量物质的存在就会影响到PCR等酶促反应，因而纯化土壤DNA最大的问题是如何有效地去除土壤中的这些抑制因子。本产品采用DNA结合柱纯化方式，应用了独特的溶液系统，能有效去除土壤样品中各种抑制因子。一次实验可同时处理一个或多个0.1-1.0g左右的土壤样品，纯化的DNA可直接用于PCR反应，酶切或定量实验。

产品组分

产品特点

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在60分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括堆肥、沉积物和粪肥等各类土壤。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。

运输和保存方法

1、本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2、试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15-25℃）进行。

3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

使用前必读

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、需要自备乙醇、RNase A（100mg/mL）等。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA产量降低。

4、SD、BB和SW中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、开始实验前将需要的水浴先预热到 65℃备用。

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer SG中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

1、称取新鲜土壤0.25g于研磨管（包含研磨珠）中，加入720μL的Buffer SH，在漩涡振荡器上振荡5min，65 ℃恒温水浴15min，每5min摇匀一次。

2、将EP管从水浴锅中取出，冷却至室温，向收集管中加入70μL溶液Buffer SD，混合均匀后在65℃下水浴1min，混合均匀，12,000rpm离心2min，留取上清液。

3、将步骤2获得的上清液转移到新的EP管中，随后加入所述上清液1/2体积的溶液Buffer BB，混合均匀，12,000rpm离心2min，留取上清液。

4、将步骤3获得的上清液转入DNA吸附柱中，吸附柱置于收集管内，静置3min，12,000rpm离心2min，弃废液，保留DNA吸附柱。

5、将步骤4获得的DNA吸附柱重新放入收集管中，向DNA吸附柱中加入500μL溶液Buffer SW，12,000rpm离心2min，弃废液，保留DNA吸附柱。

6、将步骤5获得的DNA吸附柱放入收集管中，向DNA吸附柱中加入700μL溶液Buffer SG，12,000rpm离心2min，弃废液，保留DNA吸附柱；重复一遍，向DNA吸附柱中再次加入700μL溶液Buffer SG，12,000rpm离心2min，弃废液，保留DNA吸附柱。12,000rpm空管离心2min，以去除乙醇的残留。

7、将步骤6获得的DNA吸附柱于室温至50℃下静置5min直至酒精全部挥发完。

8、 将步骤7获得的DNA吸附柱放入新的EP管内，向DNA吸附柱中加入50-100μL溶液Buffer SE，静置2min，12,000rpm离心2min，将离心液再次加入DNA吸附柱中，12,000rpm离心2min，离心液即为土壤DNA溶液。

注：本产品仅作科研用途！