• 说明书丨HRQ0642-PCR Purification Kit PCR产物纯化回收试剂盒.pdf

产品信息:

产品描述：

 本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从各种PCR产物或各种酶促反应液中，回收100bp-40kb的DNA片段，回收效率超过85%。纯化产物不含寡聚核苷酸、聚合酶、引物二聚体等杂质。纯化的产物可以用于TA连接、测序、酶切以及各类型的标记反应。

产品组分：

产品特点：

1.离心吸附柱内硅基质膜采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异小，可重复性好。

2.使用了优质结合液Buffer PB，不含传统结合液Buffer PB的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接或克隆等下游反应。

3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

运输和保存方法：

1.本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2.试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

使用前必读：

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.结合液Buffer PB中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

3.回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。

4.回收DNA的量和起始DNA的量，洗脱体积，DNA片断大小有关。一般1-15μg，100bp-5kb的DNA片段，回收率可达95％。

5.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer PE中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

1、按照5:1（结合液Buffer PB：样品）的比例，将结合液Buffer PB加入到PCR扩增产物或者酶切产物中，充分混匀。（例如50μL的PCR扩增产物或者酶切后产物加入250μL结合液 Buffer PB，充分混匀）。

2、将上一步所得溶液加入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置1 min，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

3、加入600μL的Buffer PE（请先检查是否已加入无水乙醇!）到离心柱中，12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。

4、再加入600μL的Buffer PE重复一遍，12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。

5、将吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 离心2 min，尽量除去漂洗液Buffer PE，以免残留的乙醇抑制下游反应。

6、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50µL洗脱缓冲液Buffer EB（Buffer EB事先在 80°C-90°C 水浴中预热可提高产量），室温放置 2 min，12,000 rpm离心 1 min，弃吸附柱，纯化产物即在离心管中。

▲注意1：为了增加DNA的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入到吸附柱中，室温放置1min后，12,000 rpm离心1 min，洗脱两遍可以提高大约10%的浓度。

▲注意2：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于25μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。

产品仅用于科研等非医疗用途！