• 说明书丨HRN0501-小量全血基因组DNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

     独特的结合液/白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组 DNA 在高离序盐状态下择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点

（1）不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

（2）快速，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。

（3）多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3-12µg，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

（4）从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全，客户可根据需要选择购买。典型的产量200µl全血可提取出3-12µg 基因组DNA。

运输和保存方法

（1）不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
（2）快速，简捷，单个样品操作一般可在 20 分钟内完成。
（3）多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量 200 µl 全血可提取出 3-12 µg，OD260/ OD280 典型的比值达 1.7～1.9，长度可达 20 kb-50 kb，可直接用于 PCR、Southern-blot 和各种酶切反应。
（4）从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全，客户可根据需要选择购买。
（5）典型的产量 200 µl 全血可提取出 3-12 µg 基因组 DNA。

注意事项

（1）所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式微型离心机。
（2）不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。
（3）需要自备异丙醇(添加异丙醇的步骤，首选推荐使用异丙醇，没有异丙醇也可以用乙醇替代)。
1× PBS (磷酸盐缓冲液，可选)，RNase A（可选）。
（4）开始实验前将需要的水浴先预热到 70°C 备用。
（5）为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者 4°C 存放少于 3 天的标本，不要使用反复冻融超
过 3 次的标本，否则会严重降低产量。
（6）洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该
确保批 PH 大于 7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在 -20°C。DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0），但是 EDTA 可能抑制下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

（7）本产品仅作科研用途！

关于平衡液的使用

（1）介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的
结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。
从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至 37°C 使沉淀完全消失。
（2）使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取 100 μl 的平衡液至柱子中。13,000rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

使用方法

提示 ：第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
（1）取 200 μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入 1.5 ml 离心管。如果全血起始量小于 200 μl，则用 1 × PBS 补足到 200 μl。如果起始量介于 200 μl-300 μl 之间，则后续操作需要按照比例增加试剂用量。如果起始量介于 300 μl-1 ml 之间，则需要先进行红
细胞裂解操作（可联系我们购买红细胞裂解液）。
如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量
仅用 5-20 μl，可加 1 × PBS 补足到 200 μl 后进行后续步骤。
（2）加入 20 μl 蛋白酶 K (20 mg/ml)溶液，充分混匀，再加入 200 μl 结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在 70°C 放置 10 min。溶液应变清亮（但颜色偏黑色）。
可选步骤，一般不需要：如果 RNA 残留较多，需要去除 RNA，可以在加入 200 μl 结合液 CB 前加 20 μl RNase A (10 mg/ ml)溶液，振荡混匀，室温放置 5-10 min。
平衡液预处理吸附柱备用：
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”
（3）冷却后加入 100 μl 异丙醇（也可以用无水乙醇替代），立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不
易混匀时可以涡旋振荡 15 sec 混匀。
（4）将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液。
（5）加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13,000 rpm 离心 30 sec，弃废液。
（6）加入 600 μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。
（7）重复步骤 6 一遍。
（8）将吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
（9）取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 100 μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 80-100°C 水浴中预热效果更好）， 室温放置 3-5 min，13,000 rpm 离心 1 min。可将第一次洗脱所得溶液重新加入离心柱中，室温放置 2 min，13, 000 rpm 离心 1 min。可以提高浓度 10%左右。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积
不应少于 30μl，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。
（10）DNA 可以存放在-20°C，如果要长时间存放，可以放置在-70°C