• 说明书丨HRN0521-全血组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒 .pdf

产品信息

产品描述

      独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点

1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3-6µg，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

4.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全，客户可根据需要选择购买。

5.典型的产量200µl全血可提取出3-6µg 基因组DNA。

运输和保存方法

1）裂解液TL、结合液CB、或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2）蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过25℃室温至少保存6个月，4℃保存12个月，－20℃保存2年。

3）避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1.所有的离心均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.需要自备1XPBS(磷酸盐缓冲液),和异丙醇。

3.不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。

4.开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

5.为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。

6.本产品仅作科研用途！

关于平衡液的使用

1.介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。

2.使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1.全血

a.取200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入1.5ml离心管。

如果全血起始量小于200μl，则用缓冲液BB补足到200μl。如果起始量介于200μl-300μl之间，则后续操作需要按照比例增加试剂用量。如果起始量介于300μl-1ml之间，则需要先进行红细胞裂解操作（见本说明书后附录）。

如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20μl，可加缓冲液BB补足到200μl后进行后续步骤。

b.加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入200μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。溶液应变清亮（但颜色偏黑色）。

可选步骤，一般不需要: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入200μl 结合液CB 前加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

c.冷却后加100μl异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。

d.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。

e.接操作步骤项下5。

2.组织培养细胞

a.收集约10⁵-10⁶悬浮细胞到一个1.5ml离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化后吹打下 来收集。

b.13,000rpm离心10秒，使细胞沉淀下来。弃上清，留下细胞团和大约10-20μl残留的液体。

c.加200μl 1XPBS重悬洗涤细胞，13,000rpm离心10秒，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清, 将细胞沉淀重悬于180μl 1XPBS中。

d.加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入200μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。

可选做步骤: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入200μl 结合液CB 前加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

e.冷却后加100μl异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

f.将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。

g.接操作步骤项下5。

3.动植物组织（例如鼠肝脑或者植物叶片）

a.将20-50mg新鲜或者解冻的组织用解剖刀切成小碎块（切成小块可以提高产量）或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有180μl组织裂解液TL的1.5ml离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。

b.加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。

c.将裂解物放置在55℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

可选做步骤: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤c后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

d.加入200μl 结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。

e.冷却后加100μl 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

f.用1ml的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。

如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。

g.接操作步骤项下5。

4.动物组织（鼠尾）

a.将0.2-0.5cm的鼠尾巴尖(即20-50mg)剪碎（一定要剪0-2cm范围内的尾巴尖，否则裂解效果不好），或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有180μl组织裂解液TL的1.5ml离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。

b.加入20μl的蛋白酶K(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。

c.将裂解物放置在55℃水浴3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

可选做步骤: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤c后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

d.用一个1ml不带针头的一次性输液器抽打裂解物2-3次。

e.加入200μl 结合液CB和100μl 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。

f.13,000rpm 离心5分钟，将上清加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

g.接操作步骤项下5。

上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。

5.加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。

6.加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

7.加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

8.将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热）， 室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

10.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

产品仅用于科研等非医疗用途。