高纯总RNA快速提取试剂盒

高纯总RNA快速提取试剂盒

价格:750

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产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

RNApure高纯总RNA快速提取试剂盒

HRN0151

50T

 

产品描述

 

      改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA 酶, 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

 

试剂组成:

 

试剂盒组成

50次

裂解液RL(4℃避光)

50 ml

去蛋白液PE

16 ml

第一次使用前按标签说明加指定量乙醇

漂洗液RW

10 ml

第一次使用前按标签说明加指定量乙醇

RNase-free H2O

10 ml

RNase-free吸附柱RA

50个

收集管(2ml)

50个

 

产品特点

 

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。

2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

3.独有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。

4.多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。

5.有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。

 

运输和保存方法

 

1)本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

2)因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。裂解液RL可以常温运输,收到后4℃避光可长期保存,常温保存3个月也不影响使用质量。

3)避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

 

注意事项

 

1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

2.本试剂盒抑制RNA酶效果极佳,所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。

3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,使用前需要自备氯仿。但是如果氯仿实在不好获取,也可以不使用氯仿。

5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。

6.检测OD260/OD280吸光度比值时,如需稀释RNA样品应该用TE(PH 8),如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。

7.加入裂解液RL匀浆后,加氯仿前,样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。

8.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

 

提示:

第一次用前请先在漂洗液RW瓶和去蛋白液PE瓶中加入指定量无水乙醇!

 

1.匀浆处理

a.组织

      将组织在液氮中磨碎,每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。

b.单层生长的细胞

     直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞,并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量(每10cm2加1ml)。一般情况下,普通大小的细胞培养瓶,加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶,轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。

c.悬浮生长的细胞

      通过离心来沉淀细胞,小心弃上清。每5~10×106的动物细胞,植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。

2.将匀浆样品剧烈震荡混匀,在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。

3.可选步骤:4°C的条件下12,000rpm 离心10分钟,小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8°C的条件下以12,000rpm离心10分钟,移除匀浆中不溶解的物质,余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA,而上层的超浮游物含有RNA。

4.每1ml RL加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖,剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育5分钟。

5.于4℃12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%,把水相小心转移到新管中(不要触碰中间层),记录水相体积。

6.加入水相体积一半也就是5倍体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内,若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱RA中,请分两次转入吸附柱RA中。) ,12,000rpm 离心30秒,弃废液,将吸附柱重新套回收集管。

7.加500μl去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!,12,000 rpm离心30秒,弃废液。

8.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!,12,000 rpm 离心30秒,弃废液。

9.重复步骤8一次。

10.将吸附柱RA放回空收集管中,12,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11.取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water,室温放置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟。

洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积最好不少于30μl,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。

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