价格:1,299
货号HRbio™ Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
储存 |
价格（元） |
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HRbio™ Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit |
HRF0194 |
100 T |
-20℃ |
1299.00 |
产品描述
HRbio™ Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于HRbio™ Ⅱ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。与HRbio™ M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，HRbio™ Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HRbio™ Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
试剂盒中包含由总RNA或mRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和oligo (dT)18，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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HRF0194 (100 T) |
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HRF0194-A |
RNase-free H2O |
2×1 mL |
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HRF0194-B |
5×HRbio™ Ⅱ Buffer |
400 μL |
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HRF0194-C |
HRbio™ Ⅱ Enzyme Mix |
200 μL |
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HRF0194-D |
Oligo (dT)18 (50 μM) |
100 μL |
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HRF0194-E |
Random Primers N6 (50 μM) |
100 μL |
【注】：
1）5×HRbio™ Ⅱ Buffer中包含dNTP。
2）HRbio™ Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
第一链cDNA合成操作步骤
1. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
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RNase-free H2O |
To 20 μL |
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Total RNA |
1 ng -5 μg* |
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or mRNA |
1 ng-500 ng* |
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5×HRbio™ Ⅱ Buffer |
4 μL |
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Random Primers N6 (50 μM) |
1 μL |
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or Oligo (dT)18 (50 μM) |
or 1 μL |
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or Gene Specific Primers (2 μM) |
or 1 μL |
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HRbio™ Ⅱ Enzyme Mix |
2 μL |
【可省略】：若后续实验为PCR，针对复杂模板，可将RNA、H2O、反转录引物在65℃孵育5 min 后，迅速冰上冷却，然后再加入HRbio™ Ⅱ Enzyme Mix；若后续实验为qPCR，则可省略65℃孵育步骤，直接在体系中加入HRbio™ Ⅱ Enzyme Mix。
【注】：* 若后续实验为qPCR，建议Total RNA 或 mRNA投入量不超过1 μg或100 ng，如果目的基因的表达丰度非常低，最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。
2. 逆转录程序设置
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温度 |
时间 |
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25℃ |
5 min |
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42℃ |
30 min |
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85℃ |
5 min |
【注】：
1）荧光定量实验可以只使用Random Primers N6；也可以1:1与Oligo (dT)18混合使用，效果更好。
2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
3）逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
关于引物的选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。
3）Random Primers N6适用性较广，mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板均可用Random Primers N6进行反转录。
4）使用Random primers N6，进行2 kb以下的cDNA合成时，Random primers N6的使用量为 1-2 μL；2 kb 以上的cDNA合成时，Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。