总巯基测定试剂盒

总巯基测定试剂盒

价格:200

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产品信息

 

产品名称

测定方法

产品编号

规格

总巯基测定试剂盒

微量法

HRK0564

100管/48样

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义

 

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质,而且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量,能够间接测定蛋白质巯基含量。

 

测定原理

 

巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在412nm处有最大吸收峰。

 

自备实验用品

 

天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板、乙醇和蒸馏水。

 

试剂组成和配制

 

试剂一:液体18mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体1mL×1管,4℃避光保存。 

 

样品的制备

 

1.按照组织质量(g):水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约1g组织,加入1mL蒸馏水)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.血清,培养液:稀释5倍后测定,可取1mL样本,加入0.4mL蒸馏水,混匀,置冰上待测。

 

操作步骤

 

1.酶标仪预热30min,调节波长至412nm。

2.操作表

在96孔板中加入如下试剂

 

对照管

测定管

样品(μL)

40

40

试剂一(μL)

150

150

试剂二(μL)

 

10

乙醇(μL)

10

 

混匀,25℃静置10min,测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。

 

计算公式

 

总巯基标准曲线:y = 1.8111x - 0.0037,R2 = 1,x为标品浓度,单位μmol/mL,y为吸光度ΔA。

1.组织:

(1)按样本重量计算

总巯基含量(μmol/g 鲜重)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V样总÷W=0.552×(ΔA+0.0037)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

总巯基含量(μmol/mg prot)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V样总÷Cpr=0.552×(ΔA+0.0037)÷Cpr                    

2.血清、培养液:

总巯基含量(μmol/L)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×5×103=2761×(ΔA+0.0037)

V样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;5:血清,培养液等液体样本稀释倍数;103 :1mmol/ L=103μmol/ L

 

注意事项

 

最低检出限为10μmol/L。

本产品仅作科研用途!

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