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产品信息

产品描述

      PAX血液RNA试剂盒用于从保存试剂和PAXgene®血液RNA管中储存的血液样本中分离总RNA。这个过程完全去除污染物和酶抑制剂，产生高质量的RNA。使用PAX血液RNA试剂盒纯化的RNA可用于RT-PCR等应用。

      从保存试剂中取出样品。对于储存在PAXgene®血RNA管中的血液样本，通过离心收集细胞。样品在含有蛋白酶K的优化缓冲液中洗涤和溶解。样品离心以去除细胞碎片和其他颗粒。在用乙醇调整结合条件后，将样品装载到RNA结合柱上。通过短暂的离心或真空步骤，样本通过结合RNA的柱基质。基因组DNA通过柱上DNA酶I消化处理去除。经过三个洗涤步骤后，用不含核糖核酸酶的水洗脱纯化的RNA。

产品组分

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

运输和保存方法

1）本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

2）蛋白酶K储存在甘油储存缓冲液中，在室温下储存6个月，在4°C下储存1年，在-20°C下储存2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；

2）本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在漂洗液RW瓶、漂洗液WB和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!

→将培养箱或加热块加热至55°C或65°C。

1.使用旋出式转子在3000-5000 x g的条件下离心PAXgene®血RNA管10分钟。

2.抽吸并丢弃上清液。

3.加入4毫升不含核糖核酸酶的水。旋涡使颗粒完全再悬浮。

4.使用旋出转子，在3000-5000 x g的条件下，将PAXgene®血RNA管离心10分钟。

5.抽吸并丢弃上清液。

注：不完全去除上清液将降低裂解效率并稀释裂解液，从而降低RNA产量。

6.添加350μL再悬浮缓冲液。旋涡使小球完全重新悬浮。

7.将样品转移至新的1.5 mL微量离心管中。

8.加入300μL结合缓冲液和20μL蛋白酶K溶液。旋涡5秒钟，使其充分混合。

9.使用摇动培养箱在55°C下培养10分钟。

10.可选：通过安装在注射器上的20号针头（直径0.9 mm）至少5次溶解液，或使用电子组织匀浆器进行匀浆。这一步剪切基因组DNA，降低裂解物的粘度，并提高产率。

11.以13000 rpm的转速离心均质裂解液3分钟。将上清液转移到新的离心管中。

12.加入0.5体积的100%乙醇。充分搅拌。

13.将高达700μL的混合物转移到置于2 mL收集管（提供）中的RNA结合柱中。

14.以最大速度离心1分钟。

15.抽吸并丢弃滤液，重复使用收集管。

16.重复步骤13-15，直到剩余样品转移到RNA结合柱。

17.添加350μL缓冲液RW1。

18.以最大速度离心1分钟。

19.抽吸并丢弃滤液，重复使用收集管。

20.对于每个RNA结合柱，制备DNA酶I消化反应混合物，如下所示：

每制备10倍的缓冲液体积，DNA酶I缓冲液45μL 450μL

无核糖核酸酶DNA酶I 5μL 50μL，总体积50μL 500μL

1）DNA酶I非常敏感，容易发生物理变性。请勿旋转DNA酶I混合物。将试管倒置，轻轻搅拌。

2）在RNA分离之前，新鲜制备DNA酶I储备溶液。

3）标准DNA酶缓冲液与膜上DNA酶I消化不兼容。使用其他缓冲液可能会影响RNA与基质的结合，并可能降低RNA产量和纯度。

4）所有步骤必须在室温下进行。工作要快，但要小心。

21.用移液管将50μL DNA酶I消化反应混合物直接移到RNA结合柱的中心表面。

注意：确保直接用移液管将DNA酶I消化混合物移到膜上。如果部分混合物保留在RNA结合柱的壁或O形环上，则DNA酶I消化将不完整

22.在室温下静置15分钟。

23.添加350μL缓冲液RW1。以最大速度离心1分钟。

24.抽吸并丢弃滤液，重复使用收集管。

25.添加500μL洗涤缓冲液RW。以最大速度离心1分钟。

26.抽吸并丢弃滤液，重复使用收集管。

27.对第二个清洗缓冲液RW清洗步骤重复步骤25-26。

28.以最大速度离心空RNA结合柱2分钟，以干燥柱基质。

注：在洗脱前干燥柱膜很重要。残留的乙醇可能会干扰下游应用。

29.将RNA结合柱转移至1.5 mL微量离心管中。

30.直接在膜中心添加50-70μL不含RNA酶的水（可选：将水预热至70–90℃将增加RNA产量）。在室温下静置1分钟。

以最大速度离心2分钟。