价格:936
货号Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
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Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶 |
HRF0251 |
1000U |
936.00 |
产品描述
Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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HRF0251（1000 U） |
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HRF0251-A |
Alkaline Phosphatase (30 U/μL) |
1000 U |
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HRF0251-B |
10×AP buffer |
1 mL |
产品性质
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来源（Source） |
携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母 |
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质量控制（Quality Control） |
无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染 |
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热灭活（Thermal Inactivation） |
在螯合剂存在下，65℃加热30 min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。 |
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储存液条件（Storage conditions） |
10 mM Tris-HCl（pH8.0），1 mM MgCl2，50 mM KCl，0.1 mM ZnCl2，50% glycerol. |
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活性定义（Unit definition） |
在pH9.8，37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐（p-nitrophenylphosphate）为底物，1分钟生成1 mol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。 |
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最佳pH（Optimal pH） |
该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。 |
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优化体系（Optimal Buffer） |
AP Buffer（500 mM Tris-HCl pH9.0，10 mM MgCl2） |
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
使用方法
1 DNA去磷酸化
① 在1.5 mL离心管中加入下列试剂：
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组分 |
体积 |
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无菌ddH2O |
Up to 50 L |
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DNA 片段* |
1-20 pmol |
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Alkaline Phosphatase |
1-2 L |
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10×AP buffer |
5 L |
【*】单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后，再于50℃孵育15 min。
2 酚氯仿法抽提DNA
① 苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA，0.5% SDS，50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min，灭活效果更佳。
② 氯仿/异戊醇（24:1）抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5 L 3 M NaCl（终浓度150 mM）。
② 加入125 L（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60 min，沉淀DNA。
4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20 L）。