• Minute™ 植物胞浆和胞核分离试剂盒 PF-045_CN.pdf

产品信息

产品描述

      本试剂盒用于新鲜或冷冻的柔软植物组织进行细胞组分分离。与其他商用试剂盒以及实验室常用方法不同，不需要大量起始材料（几克）和较长时间的。本试剂盒仅使用100-200毫克的起始材料，通过使用离心管柱技术配合特有专用缓冲系统，1小时左右可将样品分离成胞浆、细胞核、叶绿体和微粒体四个组分。分离原理：研磨组织以释放植物细胞，然后快速通过离心管柱破坏细胞膜，通过差速离心得到不同的细胞组分。只需使用台式离心机即可。该试剂盒已被验证用于多种样品，如拟南芥、菠菜、豌豆和油菜等。

应用

      分离的组分可用于多种应用，包括但不限于蛋白质转运研究、核蛋白提取和核酸纯化/测序。分离出的高纯度核可用于蛋白质组学、流式细胞术分析、DNA测序、蛋白质-蛋白质和蛋白质-DNA相互作用研究。

使用说明

1. 将 100-150mg 新鲜/冷冻的植物嫩叶加到离心管柱套管中，翻动按压叶片将其塞入到离心管柱中。加入100ul 缓冲液 A，用 200ul 吸头按压叶片 100-200 次以压缩叶片体积（此步大概需要 2-3min）。

2. 用研磨棒的平头端用力按压研磨 100-200 次（大约 2-3min）。（注意：研磨棒可重复使用，用 70%酒精擦拭或用蒸馏水冲洗干净，用纸巾擦干。）

3. 再加 300ul 缓冲液 A 到离心柱中，用 200ul 吸头将样品搅拌混匀。盖上盖子，1500Xg 离心 5min，弃去离心管柱。（可选优化：离心后，将接收管中 200ul 上清转回离心管柱上重复研磨，可增加最终产量）。如需分离胞浆及微粒体组分收集管中的上清转移到一个新的 1.5ml EP 管中放到冰上备用（不分离可弃掉），沉淀用 1ml 预冷的 PBS 吹打重悬，然后 1200Xg 离心 5min。弃掉上清，加入 1ml 缓冲液 A 吹打重悬沉淀，同时添加 20ul 缓冲液 B，大力振荡 10-20s。确定沉淀完全复溶。

以下操作步骤根据实验需求选择，如需分离胞浆及微粒体组分，从 4A 步骤开始，如仅需细胞核组分，从 4B步骤开始。

4A. 分离细胞浆和微粒体组分：

第 3 步所得上清 4000Xg 离心 10min（沉淀主要为破碎的叶绿体）。将上清转移到一个新的 1.5ml EP 管中，16000Xg 离心 30min。（上清是胞浆组分，沉淀是已经去除大部分细胞核及叶绿体的微粒体组分即：细胞器和质膜组分）

4B. 分离细胞核:

a. 将第 3 步重悬的沉淀在冰上孵育 5min，1200Xg 离心 5min。

b. 完全去除上清，沉淀用 200ul 预冷的 PBS 移液器上下吹打 30-40 次重悬。

c. 将 1.2ml 缓冲液 C 加到一个新的 1.5ml EP 管中，将前面 PBS 重悬的沉淀用移液器小心贴着管壁缓慢吹出到 C 液上方，

d. 1200Xg，离心 5min，离心后清晰可见一个白色或浅绿色沉淀以及绿色上清。将上清完全去除干净，用 0.5ml 预冷 PBS 清洗沉淀（沉淀为分离的完整细胞核）。细胞核可以根据下游实验复溶在合适的溶解液中。例如：蛋白抽提实验，可以将核用 50-100ul 溶解液裂解，得到的蛋白可以进行 WB 检测，ELISA 或者 IP（详见下表以及技术说明）。测定蛋白浓度，推荐使用 BCA 法。如果下游是做流式检测分析可以用 0.2-0.5ml 含 5%BSA 的 PBS 重悬细胞核。核酸提取，可用 Tris 缓冲液或者其他合适的细胞核缓冲液重悬。

储存条件

常温运输，4℃下储存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！