• 说明书丨HRD0871-TMB One Solution (HRP-based ELISA) 单组分TMB显色液（ELISA，HRP显色用）.pdf

产品信息

产品描述

TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，中文全称3,3',5,5'-四甲基联苯胺，是辣根过氧化物酶（HRP）的常用显色底物之一。在HRP的催化下，TMB被过氧化氢（H₂O₂）氧化生成蓝色产物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸终止上述反应后，产物转变为黄色，最大吸收峰为450 m。传统的TMB显色试剂通常以AB液形式提供（TMB和H2O2溶液分到两管，仅在使用前才可混合使用），并且容易产生沉淀，使用起来相对不方便，且容易导致操作误差。为克服以上缺点，我司采用最新的TMB显色技术，将所有相关试剂全部混合配成单一溶液。具有以下优点：

1）即开即用，操作简单，使用前无需做AB液混合的准备；检测灵敏度不低于AB液体系；

2）仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，也降低了操作误差，结果更加稳定；

3）含有独特的稳定剂，保证溶液4℃下长期保存；

4）相比于其他HRP酶显色底物（如ABTS和OPD）相比，检测灵敏度更高，而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有机溶剂，安全无毒；

5）另外，TMB溶液可分为沉淀可溶型和沉淀不可溶型，前者适用于ELISA及其他通过液体反应检测HRP的应用，后者适用于WB或其他通过沉淀反应检测HRP的应用。

本品为单一溶液形式且沉淀可溶型的TMB显色液，适用于ELISA检测，操作时只需加入200μl即用型的显色液，做简单孵育，加入2M H₂SO₄终止反应后，即可用分光光度计在450nm处测定吸光度。本品可供完成约500个样品的检测。另外，本品也可用于血液或血红蛋白等样品中过氧化物酶量的检测。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃避光保存，一年有效。

注意事项

1）TMB对人体有刺激性，请注意适当防护。

2）正常情况，本显色液呈现无色或者淡蓝色（OD650nm＜0.04）。若是出现浑浊，或者颜色明显很蓝，应停止使用。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1） 使用之前，取出适量单组份TMB显色液，使其回到室温再开始使用；

2） 对于ELISA检测：参考ELISA 检测试剂盒的实验步骤，当加入HRP标记的抗体并孵育一段时间后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。洗涤完毕后，去除洗涤液，加入200μl TMB显色液。
对于在96孔板内进行的其他适当检测（如检测组织或细胞样品内源性过氧化物水平）：直接在96孔板内加入10-20μl 样品，之后加入200μl TMB显色液；

3） 室温避光孵育3-30min或更长时间（可长达24h），直至显色至预期深浅（此时反应液为蓝色）。

4） 加入50μl 2M H₂SO₄终止反应，溶液由蓝色转变为黄色，随后在450nm测定吸光度。或直接在370nm或652nm测定吸光度。

常见问题

1. 背景显色太深

1）如果背景（没有样品的对照）显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，如商业化的封闭液或者商业化的和一抗相同来源的血清（5-10%）进行封闭。另一方面，直接使用经过适当亲和吸附的二抗，以减小二抗的非特异性交叉吸附。

2）可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

3）可考虑TMB底物本身反应过于强烈。为了避免沉淀的产生，可在终止反应后马上读数，或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。

2. 没有显色或显色太弱

1）适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否被正常显色。

2）可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

3）可以适当延长显色时间。

4）如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。