价格:128
货号2×Profusion™ PCR Master Mix 超高保真酶预混液
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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2×Profusion™ PCR Master Mix 高保真酶预混液 |
HRF0088 |
1 mL |
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HRF0089 |
5×1 mL |
产品描述
本产品包含 Profusion™ DNA Polymerase、dNTPs 和优化的反应缓冲液，浓度为2×。 使用时只需加入模板、引物，并补足水至 Mix 终浓度为 1×即可。Profusion™ DNA Polymerase为多种采用最先进基因工程改造而来的超高保真酶添加延伸因子混合而成，极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。Profusion™ PCR Master Mix 是长片段超保真快速扩增的首选产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR 产物为平末端，不需要加 A 头，可直接用荷瑞 pTOPO Blunt 平末端系列载体（货号 HRF0161、HRF0171）克隆。
2×Profusion™ PCR Master Mix 具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物 和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。
产品特点
1.扩增速度快：延伸速度可以达到 3-4kb/min，是pfu的 6-8 倍。
2.扩增产量高：一般PCR产物量比传统 pfu产量高 50%-100%。
3.优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
4.扩增长度长：以复杂基因组 DNA 为模板适合扩增不超过 10kb 左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过15kb 左右的产物。
产品应用
基因克隆；复杂 DNA 模板扩增；高通量建库。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
注意事项
1）解冻后 Master Mix 可能出现晶体沉淀,使用前务必涡旋振荡混匀至沉淀消失，不影响试剂性能。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；
3）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系（冰上配制）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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ddH2O |
to 50 μL |
- |
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2×Profusion™ PCR Master Mix |
30 μL |
1× |
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DNA 模板 |
适量 |
- |
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Primer 正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer 反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
参考模板用量（50 μl 反应体系）：
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模板种类 |
DNA模板用量 |
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人类基因组 DNA |
50 ng-150 ng |
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细菌基因组DNA |
10-100 ng |
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质粒 |
0.1-10 ng |
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cDNA |
1-5 μL From RT reaction |
建议PCR扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
95℃ |
3 min |
1 |
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变性 |
95℃ |
10 sec |
30 |
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退火 |
Tm |
15 sec |
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延伸 |
72℃ |
20 sec/kb |
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终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
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4-8℃ |
Hold |
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注意事项：
1. 2×Profusion™ PCR Master Mix扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模板可以采用10-15秒/kb；复杂模板如人类基因组可以采用20-25 秒/kb。
2. 如果电泳发现主带上下拖尾模糊现象，或者泳道出现从上样孔拖下来的涂抹带现象，一般提示延伸时间过长，梯度缩短延伸时间（建议 10-15 秒/kb 为梯度减少延伸时间）直到获得满意结果。
3. 对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98℃。Profusion™ DNA Polymerase耐热性强，98℃对酶的活性无影响。
4. 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7M。并采用降落PCR（Touch down PCR）