• 说明书丨HRN0231-病毒核酸DNARNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

      本病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、全血、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求， 如病毒RNA：HCV（丙肝病毒）、HIV（艾滋病毒）和HTLV（人类嗜T淋巴细胞病毒）； 病毒DNA：HBV（乙肝病毒）和CMV（巨细胞病毒）等。病毒裂解后，DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗-离心等步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后通过洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR分析。

产品特点

1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA/RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

产品组分

运输和保存方法

1）室温储存12个月不影响使用效果， 各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2）Poly Carrier常温运输，4℃可存放一个月，长期保存置于-20℃保存。

注意事项

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。

3.BB结合液和IR抑制剂去除液中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.Poly Carrier：

Poly Carrier使用方法：如果起始处理量很少，我们推荐使用Poly Carrier，如果预期有较大量核酸产量，用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。使用时在每个样品提取所需裂BB结合液中加入4μl Poly Carrier储存溶液， 将BB结合液与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(BB结合液容易起泡沫，请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在BB结合液中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

6.如果是全血样品，EB洗脱液使用前建议用70℃预热。

5.本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在IR和WB溶液中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1.200μl血清、血浆或者全血等体液（需恢复到室温，不足可用0.9% NaCl或者PBS补足）转入1.5ml离心管，加入200μl BB结合液和50μL Proteinase K， 立刻涡旋振荡充分混匀。

如果处理样品量小或者病毒预期浓度较低，建议在200μl BB结合液中加入2μl Poly Carrier储存溶液。

2.72℃孵育10min，加入100μL BB结合液，充分混匀。

3.将上述混合物加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。

如果总体积超过750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱RA中。

4.加500μl IR抑制剂去除液，12,000rpm离心1min，弃废液。

5.加入450μl WB漂洗液（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心1min，弃废液，加入450μl WB漂洗液，重复一遍。

6.将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm离心10s，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

7.取出吸附柱RA，放入一个RNase free的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μl EB洗脱液（事先在 65－70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置1分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA/RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要DNA/RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于20μl，体积过小降低洗脱效率，减少DNA/RNA产量。

8.病毒DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。病毒RNA建议最好立刻使用，否则应该立刻放置在-70℃备用。

9.洗脱出的DNA可直接运用于PCR实验（10-20μL DNA洗脱液），洗脱出的RNA也可以直接用于RT-PCR（3.5μL病毒RNA洗脱液）。