• 说明书丨HRQ0151-TRIpure高纯度总RNA提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

     本试剂盒适用于从细菌、细胞、动/植物组织和血液中提取高纯度的RNA。本试剂盒结合了TRIzol®法的裂解能力强，提取量高的特点，同时又具有离心柱法提取的RNA纯度高的优点。非常适合大量提取RNA，为快速提取RNA提供了一个简洁的方案。

      本试剂盒首先使用TRIzol®裂解样品，然后加入RNA Extraction Reagent，溶液分为无色的水相和红色的有机相，RNA则溶解在水相中，将水相中RNA加入离心柱中，经过多次漂洗后，最终洗脱出高纯度的RNA，该RNA可用于RT-PCR，Northern-blot等各种下游实验。

试剂组成：

产品特点

1.离心吸附柱内硅基质膜采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异小，可重复性好。

2.结合了TRIpure Reagent稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

3.独家改良的TRIpure Reagent配方，可以有效的消除基因组污染。

4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。

运输和保存方法

1）本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

2）因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。TRIpure Reagent可以常温运输，收到后4℃避光可长期保存，常温保存3个月也不影响使用质量。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1.第一次使用前请先在去蛋白液RW1和漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

2.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。

3.检测OD₂₆₀/OD₂₈₀吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE（PH 8)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD₂₈₀升高，从而使比值降低。

4.加入TRIpure Reagent匀浆后，加RNA Extraction Reagent或氯仿前，样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。

5.本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次用前请先在Buffer RW1瓶和Buffer RW瓶中加入指定量无水乙醇!

 1.匀浆处理

a.贴壁培养细胞

①倒弃培养液，用1×PBS洗涤一次。

②每10cm²生长的培养细胞中加入1mL的TRIpure Reagent，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，静置片刻，用移液器吹打细胞使其脱落（亦可用细胞刮刀剥离细胞）。

③细胞裂解物转移至离心管中，加入0.2mL的RNA Extraction Reagent或氯仿，用移液器反复吹打直至裂解液中无明显沉淀。

④室温涡旋振荡5分钟。

b.菌液、悬浮细胞

①将菌液或悬浮细胞倒入离心管中，8,000×g 离心2分钟，弃上清。

②加入TRIpure Reagent（每≤2×10⁹个细菌或≤1×10⁷个细胞中加入1mL的TRIpure Reagent）。

③加入0.2mL的RNA Extraction Reagent或氯仿，用移液器反复吹打直至裂解液中无明显沉淀。

④室温涡旋振荡5分钟。

c.血液样品

①加入TRIpure Reagent（每≤200μL血液中加入1mL的TRIpure Reagent，血液量不低于50μL）。

②加入0.2mL的RNA Extraction Reagent或氯仿，用移液器充分吹吸混匀

③室温涡旋振荡5分钟。

d.动物、植物样品

①将超低温冷冻的样品称量后迅速转移到液氮预冷的研钵中，用研杵充分研磨，直到研磨成粉状，中间可补加液氮。若不研磨充分彻底将会影响RNA的提取量和质量。

②将研磨成粉末状的样品转移到离心管中，每50-100mg样品加入1mL的TRIpure Reagent，同时加入0.2mL的RNA Extraction Reagent或氯仿，用匀浆仪进行匀浆处理，或用移液器反复吹吸混匀。

③室温涡旋振荡5分钟。

2.在2-8℃下，10,000×g离心15min。样品将被分成三层，上层无色的水相、中间层、和下层红色的有机相。RNA被保留在水相中，水相体积大约是TRIpure Reagent的50%-60%（注意在吸取上层水相的时候，避免吸到中间层的DNA。）

3.转移无色的水相到新的离心管中，加入等体积的无水乙醇或5倍体积异丙醇，轻轻颠倒混匀（此时可能会出现沉淀）。

4.将上述获得的溶液和可能得沉淀一起加入离心柱中，12,000×g离心30s，倒弃流出液（如果溶液体积大于离心柱容量，可以分几次完成）。

5.加入500μL的Buffer RW1（使用前请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000×g离心30s，倒弃流出液。

6.重复步骤5一次。

7.加入500μl的Buffer RW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 ×g离心30s，倒弃流出液。

8.重复步骤7一次。

9.12,000×g离心2min，以彻底去除残留的乙醇。

10.将离心柱放入RNase-free Tube中，加入50-200μL的无酶水在离心柱中央，室温静止1min，12,000×g离心1min，洗脱RNA，RNA即在离心管中。

11.可选步骤：为了获得更多RNA，建议重复步骤10进行二次洗脱。

12.将RNA放在-80℃长期保存。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μl，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。

注：TRIzol®是life scientific公司注册商标