价格:650
货号乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
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乳酸含量（LA）试剂盒 |
分光光度法 |
HRK1033 |
50管/24样 |
正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加15mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1支，4℃避光保存。
标准品：液体1mL×1支，4℃保存。
显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有5个棕色空瓶）
样本处理
1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取上清测定。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取上清测定。
3.血清：直接测定。
测定操作
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样品对照管 |
样品测定管 |
标准对照管 |
标准测定管 |
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样品（μL） |
50 |
50 |
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标准品（μL） |
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50 |
50 |
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H2O（μL） |
300 |
450 |
300 |
450 |
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试剂一（μL） |
150 |
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150 |
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试剂二（μL） |
200 |
200 |
200 |
200 |
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显色液（μL） |
300 |
300 |
300 |
300 |
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充分混匀，于37℃反应30min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定530nm处吸光值，分别记为A1，A2，A3，A4，△A样=A2-A1；△A标= A4-A3 |
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注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管
计算公式
1.按照蛋白含量计算
LA含量（μmol/mg prot）=△A样÷△A标×C标÷ Cpr=2×△A样÷△A标÷ Cpr
2.按照样本质量计算
LA含量（μmol/g 鲜重）=△A样÷△A标×C标÷ W=2×△A样÷△A标÷ W
3.按照细胞数量计算
LA含量（μmol/104 cell）=△A样÷△A标×C标÷ 细胞数量=2×△A样÷△A标÷ 细胞数量
4.按照液体体积计算
LA含量（μmol/mL）=△A样÷△A标×C标=2×△A样÷△A标
C标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL
注意事项
1.若吸光值超过2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2.最低检出限为8μmol/L。
3.本产品仅作科研用途！