价格:425
货号Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
储存 |
价格（元） |
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Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签） |
HRX0131 |
100 U |
-20℃ |
425.00 |
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Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签） |
HRX0132 |
200 U |
-20℃ |
645.00 |
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Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签） |
HRX0133 |
500 U |
-20℃ |
1245.00 |
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Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签） |
HRX0134 |
1000 U |
-20℃ |
2145.00 |
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Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签） |
HRX0135 |
5000 U |
-20℃ |
6745.00 |
产品描述
重组肠激酶（rEK）是高纯度的牛肠激酶轻链亚基，它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，本rEK具有比天然酶更高的切割活性。
本品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，适用范围广，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，故后续不需将其去除。
运输和保存方法
冰袋运输。试剂盒内组分-20°C保存两年，尽量避免反复冻融（5次以内没问题）。
基本特性
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来源（Source） |
E.Coli |
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分子量（Molecular Weight） |
理论值25.850 kDa |
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外观（Appearance） |
无菌液体 |
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酶浓度（Enzyme Concentration） |
10000 U/mL，相当于10 U/uL |
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活性定义（Activity Definition） |
一个活性单位定义为25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量 |
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内毒素检测（Endotoxin） |
用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg |
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质量保证（Quality assurance） |
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性 |
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常见影响肠激酶活性的因素（Influence factors） |
>2 M尿素，>200 mM NaCl，>20 mM β-ME，>0.1%SDS，>50 mM咪唑，或>5%甘油 |
应用举例
【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
1）反应体系
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融合蛋白 |
0.05-0.1 mg（蛋白浓度：0.1-1 mg/mL） |
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Enterokinase |
0.1-0.2 U |
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缓冲体系 |
25 mM Tris-HCL 8.0 |
注：缓冲液的使用体积等比例融合蛋白和酶使用量的总和。
2）反应条件：25°C过夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。
【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1单位的溶液使用。
反应条件：4°C低温酶切条件，完全酶切需要48-64 h 或者增加2-3倍酶量。
注意事项
1）本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
2）在＞200mM咪唑，或＞200mM NaCl，或＞5%甘油，酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释，使得各组分低于干扰浓度后再酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
3）磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
4）本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。
5）蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7）本产品仅作科研用途！
FAQ
1）请问可否提供该重组肠激酶酶切效果验证结果？
（1）使用0.1 U本品酶切50 ug底物，反应条件是25℃，酶切不同时间梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）。
酶切结果：重组肠激酶酶切底物24 h，可完全酶切，更长时间的酶切特异性良好。
（2）4℃低温酶切条件：4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。
酶切结果：使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物，反应温度是4℃，酶切不同时间梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）
2）如果需要去除重组肠激酶，该如何去除？
本品不含标签，后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：
平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
【注】①如果使用纯化柱，注意流速不要太快。确保样品与胶的接触时间不少于10 min。也可以直接将胶加入到酶切缓冲液中直接动态吸附30 min。②如酶切缓冲液中含有其他成分，如NaCl，甘油等，会影响吸附效果。