价格:280
货号BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒)
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
| BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒) | HRX0121 | 500T | 280 |
| BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒) | HRX0122 | 2500T | 800 |
| BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒) | HRX0123 | 5000T | 1500 |
产品描述
BCA Protein Assay Kit是一种即用型的Western blot相关总蛋白分析试剂，可通过测量562nm处的吸光度并与蛋白标准物的吸光度-浓度曲线进行比较，快速测定总蛋白浓度。蛋白质定量过程可以在45分钟内完成。
基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物。同时将Cu2+还原成Cu+。该测定法的紫色反应产物是由两个BCA分子与一个亚铜离子螯合形成的。 这种水溶性复合物在562nm处表现出很强的吸光度，在较宽的工作范围 (20-2,000μg/ ml) 中， 随着蛋白质浓度的增加，吸光度几乎呈线性。
BCA方法不是真正的端点方法，也就是说最终颜色会继续变化。但是孵育后颜色变化的速度足够慢可以允许分析大量的样品。据报道蛋白质的大分子结构，肽键的数量以及四种特定氨基酸 (半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸和酪氨酸) 的存在与BCA的颜色形成有关。对二肽、三肽和四肽的研究表明颜色形成的程度不仅仅是由单个产生颜色的官能团的总和引起的。
因此通常参考诸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常见蛋白质的标准来确定待测蛋白质浓度。从蛋白质制备一系列已知浓度的稀释液，并与待测物一起进行测定，然后根据标准曲线确定每个待测物的浓度。如果需要精确定量待测蛋白质，建议选择质量与待测蛋白质相似的蛋白质标准品。例如在测定免疫球蛋白样品时，可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 标准品。在介绍的两种检测法中，其中试管检测法需要更大体积 (0.1mL) 的蛋白质样品，但是由于它使用的样品与工作试剂之比为1:20 (v / v)，因此干扰物质的影响降至最低。
产品特性
| 组分 | 500 tests | 2500 tests | 5000 tests |
| BCA Reagent A | 100 mL | 500 mL | 500 mL × 2 |
| BCA Reagent B | 3 mL | 5 mL × 3 | 5 mL × 6 |
| BSA Standards 2mg/mL |
1 mL × 4 | 1 mL × 10 | 2 mL × 10 |
使用方法
A.试管配制
1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B。即将50ml BCA试剂A与1ml BCA试剂B混合。
注意: 使用以下公式确定所需工作试剂的总量： (标准品+待测样品) x (重复次数) x (每个样品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液总体积。
2.按照表1配制新的标准品体系。(用0.9% NaCl或PBS稀释白蛋白 (BSA) 标准液)。
表1：白蛋白(BSA)标准品的制备
| 试管编号 | 稀释液体积 (μl) | BSA体积 (μl) | BSA终浓度 (μg/ml) |
| A | 0 μl | 900 μl of 2 mg/ml Stock | 2000 μg/ml |
| B | 100 μl | 300 μl of tube A | 1500 μg/ml |
| C | 300 μl | 300 μl of tube A | 1000 μg/ml |
| D | 200 μl | 200 μl of tube B | 750 μg/ml |
| E | 300 μl | 300 μl of tube C | 500 μg/ml |
| F | 300 μl | 300 μl of tube E | 250 μg/ml |
| G | 300 μl | 300 μl of tube F | 125 μg/ml |
| H | 400 μl | 100 μl of tube G | 25 μg/ml |
| I | 300 μl | 0 | 0 (blank) |
3.将0.1ml的每种标准品和蛋白质样品加入单独的标记试管中。
4.在每个试管中加入2 ml BCA工作试剂并充分混合。
5.在37°C下孵育30分钟。
注意：增加孵育时间和温度会增加每次测试的净562 nm吸光度, 并同时降低试剂盒的最低检测水平和 测试范围.
6.将所有管子冷却到室温(RT)。
7.将分光光度计的波长设置为OD 562nm。用水将仪器校准为零。随后在10分钟内测量所有样品的吸 光度。
注意: 即使冷却至室温后，色彩仍会继续显影。但是，如果所有吸光度测量均在10分钟内进行，则随后 在RT处的显影太弱而不会产生明显的误差。
8.从所有读数中减去空白的OD562。
9.绘制BSA标准曲线: OD562 (Y轴) vs BSA标准浓度 (X轴)。 使用标准曲线确定每个待测样品的蛋 白质浓度。
B. 微孔检测法
1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B。即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合。
注意: 使用以下公式确定所需工作试剂的总量：(标准品+待测样品) x (重复次数) x (每个样品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液总体积。
2.按照表2配制新的标准品体系。(用0.9% NaCl或PBS稀释白蛋白 (BSA) 标准液)。
表2：白蛋白(BSA)标准品的制备
| 孔编号 | 稀释液体积(μl) | BSA体积 (μl) | BSA终浓度 (μg/ml) |
| A | 0 μl | 200 μl of 2 mg/ml Stock | 2000 μg/ml |
| B | 30 μl | 90 μl of tube A | 1500 μg/ml |
| C | 60 μl | 60 μl of tube A | 1000 μg/ml |
| D | 60 μl | 60 μl of tube B | 750 μg/ml |
| E | 60 μl | 60 μl of tube C | 500 μg/ml |
| F | 60 μl | 60 μl of tube E | 250 μg/ml |
| G | 60 μl | 60 μl of tube F | 125 μg/ml |
| H | 100 μl | 25 μl of tube G | 25 μg/ml |
| I | 60 μl | 0 | 0 (blank) |
3.将25μl的每种标准品和蛋白质样品添加到单独的微孔板孔中。
4.向每个孔中添加200μlBCA工作试剂并混合。
5.密封板并在37°C下孵育30分钟。
6.将板冷却至室温(RT)。
7.在10分钟内在读板器上测量562 nm的吸光度。
8.从所有读数中减去空白的OD562。绘制BSA标准曲线: OD562 (在Y轴上) 对BSA标准浓度 (在X轴上)。使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度。
重要产品信息
1.如果将本试剂盒冷藏或存放在冷库中，则试剂A或试剂B中可能会形成沉淀物。要溶解沉淀物
请在37°C下缓慢加热溶液，同时进行混合或微波处理几秒钟。如果试剂盒被细菌污染，则将其丢弃。
2.如果样品中仍然存在还原性物质或金属螯合物而引起干扰，建议使用Bradford分析试剂盒，
3.建议一式两份地测定不同浓度和样品的标准液。每种测定均应绘制标准曲线。
4.彻底混合试剂A和试剂B后，新形成的绿色浊度将消失。它不会影响性能。
5.使用分光光度计检测蛋白质浓度时，测定的样品量将减少。使用37°C的培养箱时，请防止水蒸发的影响。
6.消除或最小化干扰物质影响的几种方法:
•通过透析或凝胶过滤去除干扰物质。
•稀释样品，直到物质不再干扰为止。
•由于高浓度的去污剂也会影响结果，因此请用三氯乙酸 (TCA) 沉淀样品中的蛋白质。
7.避免使用包括还原性物质、螯合剂、强酸和强碱在内的物质，因为即使浓度很低也会干扰蛋白质的估算。
运输储存方法
按照产品包装上标识运输储存。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！