• 说明书丨HRQ0531-细菌基因组DNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息:

产品描述：

      本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从细菌（包含革兰氏阳性和革兰氏阴性菌）中快速提取基因组DNA。只要30min左右即可完成提取，操作简单，使用方便。提取出的基因组DNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

     本细菌基因组DNA提取试剂盒通用性较强，应用范围较广，目前验证的部分菌有：金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、出血性大肠杆菌 O157：H7、单增李斯特、沙门氏菌、阪崎肠肝菌等。

     本试剂盒可从1-5 ml细菌培养液中，提取10-40μg纯净的基因组 DNA，所得基因组 DNA 可直接用作 PCR 模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、出血性大肠杆菌 O157：H7、单增李斯特、沙门氏菌、阪崎肠肝菌等各类细菌。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。

产品组分：

运输和保存：

1、本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2、试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机

2、需要自备乙醇、1×PBS、RNase A（100mg/mL）、lysostaphin（用于某些难裂解的革兰氏阳性菌）等。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA产量降低。

4、ATL、AL和AW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、开始实验前将需要的水浴先预热到 56℃备用。

6、本产品仅作科研用途！

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer AW1，Buffer AW2中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

一、革兰氏阳性菌

1.取1-2mL培养菌液（最多不超过2×10⁹个细胞）到离心管中；12,000rpm离心10min，尽可能吸弃上清，收集菌体。（起始处理量可以根据细菌密度、细胞种类、预期产量进行调整 ，但是离心吸附柱最大吸附能力是40μg 基因组DNA，如果菌体过量超过最大吸附能力 ，反而会严重降低产量）。

2、加入180μL 溶菌酶裂解液重悬细菌，37℃孵育至少30min。

3、加入25μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育30min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

4、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

5、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、重复一遍步骤7。

9、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

10、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

11、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）

二、革兰氏阴性菌

1、取1-2mL培养菌液（最多不超过2×10⁹个细胞）到离心管中；12,000rpm离心10min，尽可能吸弃上清，收集菌体。（起始处理量可以根据细菌密度、细菌种类、预期产量进行调整 ，但是离心吸附柱最大吸附能力是40μg 基因组DNA，如果菌体过量超过最大吸附能力 ，反而会严重降低产量）。

2、加入180μL Buffer ATL重悬洗涤细菌。

3、加入20μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育10min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

4、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

5、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、重复一遍步骤7。

9、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

10、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

11、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）