• Minute™ 质谱总蛋白提取试剂盒 MS-026_CN.pdf

产品信息

产品描述

      质谱分析已经成为蛋白质分析和鉴定的常用方法。传统的总蛋白提取方法，例如 RIPA 缓冲液蛋白提取存在着提取蛋白不完整的问题，并且 RIPA buffer 中的某些成分不能兼容下游应用实验。我们开发的 Minute ^TM质谱/总蛋白提取试剂盒可以克服这些问题，该试剂盒可以快速高效从动物细胞或组织中提取完整的总蛋白，无偏差。提取的蛋白质兼容胰酶消化，iTRAQ 标记和生物素标记。由于使用离心管柱技术提取，提取量小可低至 20ul，最大可达 500ul。这个特有的特性可以有效解决起始材料不足的问题。总蛋白可以被快速提取，产量高达 2-8mg/ml。

应用

      该试剂盒能有效的提取总蛋白，可应用于胰酶消化后的质谱分析，iTRAQ，生物素标记和其他应用。

使用说明

细胞样品总蛋白提取

A．非贴壁细胞

1.将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。

2.低速离心收集细胞，在 1.5ml 离心管中加入预冷的 PBS，涡旋震荡,500xg 离心 2-3 分钟清洗两次细胞。吸去上清，

剩余与细胞体积相同体积的 PBS。涡旋震荡重悬细胞。

3.加入表格 1 中相应体积的细胞裂解液，涡旋震荡裂解细胞。

4.将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000xg 离心 30 秒取出

5.立刻将收集管放置于冰上，弃去离心管柱，蛋白提取完成可应用于下游实验。

6.加入 6X 的冷丙酮（1 倍体积蛋白溶液+6 倍体积丙酮，储存于-20 oC）。混匀，在-20℃孵育至少 1 小时到过夜（蛋

白浓度＜1mg/ml 时推荐过夜孵育）。

7.孵育后，台式离心机 14000-16000xg，4oC 离心 10-15 分钟。弃掉上清液，让其在空气中干燥。沉淀即为提取的总

蛋白。可根据下游实验用不同的缓冲液溶解沉淀。

B． 贴壁细胞

1.将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。

2.将贴壁细胞培养至 90%-100%融合，将预冷的 PBS 直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗两次细胞，吸去上清。

3.按照表 2 中将相应体积的细胞裂解液均匀的加入整个器皿表面，用吸头或移液管刮擦表面，吹打几次后将裂解的细胞转

移到预冷的离心管柱套管中，14000xg 离心 30 秒取出。弃掉离心管柱，将收集管置于冰上。

4.加入 6X 的冷丙酮（1 倍体积蛋白溶液+6 倍体积丙酮，储存于-20 oC）。混匀，在-20℃孵育至少 1 小时到过夜（蛋

白浓度＜1mg/ml 时推荐过夜孵育）。

5.孵育后，台式离心机 14000-16000xg，4oC 离心 10-15 分钟。弃掉上清液，让其在空气中干燥。沉淀即为提取的总

蛋白。可根据下游实验用不同的缓冲液溶解沉淀。

动物组织总蛋白提取

以下步骤是从 15-20mg 动物组织中提取，如果起始量较大或者较小，需调整相应裂解液的用量 比例。

1.将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷

2.将 15-20mg 新鲜或冷冻组织放置于离心管柱上，用塑料棍扭转研磨 50-60 次，加入 200ul 细胞裂解液，继续研磨

30-60 次。注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。

3.最高速度 14000xg 离心 1 分钟取出。弃掉离心管柱，将收集管置于冰上。

4.加入 6X 的冷丙酮（1 倍体积蛋白溶液+6 倍体积丙酮，储存于-20 oC）。混匀，在-20℃孵育至少 1 小时到过夜（蛋

白浓度＜1mg/ml 时推荐过夜孵育）。

5.孵育后，台式离心机 14000-16000xg，4oC 离心 10-15 分钟。弃掉上清液，让其在空气中干燥。沉淀即为提取的总

蛋白。可根据下游实验用不同的缓冲液溶解沉淀。

储存条件

常温。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！