Pmel

价格:460

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产品详情

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Pmel	HRF0452	50 rxns

产品描述

本公司生产的快速内切酶Pmel是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。

color reaction buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。color reaction buffer 的红色染料与 2500 bp 双链DNA片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp 双链DNA片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

酶切位点

5'...G T T T ↓ A A A C...3'

3'...C A A A ↑ T T T G...5'

同裂酶：MssI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

注意事项

1.可在 5~15 min 内完成反应

2.最适反应温度为 37℃

3.对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻

4.失活条件为 80℃ 温育 20 min

5.3h温育未表现星号活性，更长时间酶切可能出现星号活性

6.本产品仅作科研用途！

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。

产品组成

使用方法

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

组分	质粒 DNA	PCR 产物	基因组 DNA
ddH₂O	15 μl	16 μl	30 μl
10× reaction buffer或 10× color reaction buffer	2 μl	3 μl^a	5 μl
底物 DNA	2 μl (up to 1 μg)	10 μl (~0.2 μg)	10 μl (5 μg)
Pmel	1 μl	1 μl	5 μl
Total	20 μl	30 μl	50 μl

本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10 ×reaction buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60 min（基因组 DNA）；不建议长时间酶切；

④ 80℃温育20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）；

⑤ 如果使用color reaction buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

① 每种快速内切酶的用量为1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；

② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

DNA	1 μg	2 μg	3 μg	4 μg	5 μg
Pmel	1 μl	2 μl	3 μl	4 μl	5 μl
10× reaction buffer 或 10× color reaction buffer	2 μl	2 μl	3 μl	4 μl	5 μl
Total	20 μl	20 μl	30 μl	40 μl	50 μl

注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。 PmeI 在切割某些超螺旋质粒时效率偏低，如遇切割不完全可适当增加酶量，但温育时间不要超过3 h。